《多組分microRNA流式螢光同時檢測新技術》是依託復旦大學，由劉彩雲擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：多組分microRNA流式螢光同時檢測新技術
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉彩雲
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
MicroRNA調控細胞的分化是一個複雜的過程，而多種microRNA的同時檢測是解釋其生物功能的基礎，也是目前臨床診斷技術的熱點。近年來快速發展的流式螢光技術，不僅具有以往微陣列晶片高通量特性，且操作簡單、重複性好、靈敏度高，特別適合於一份微量標本，多項指標的快速檢測。本課題組最近採用髮夾DNA空間位阻法，構建了一種新型多組分microRNA流式螢光檢測技術，發表在2014年《Analytical Chemistry》上，但其檢測限僅為0.5 pM，檢測前需對血清樣本進行4倍以上的富集。本課題旨在藉助SiO2微球、報告探針聚合酶擴增和轉移酶加尾等放大平台，進一步提高檢測靈敏度，更好地套用於臨床真實樣本的靈敏準確檢測。以上擬構建的新型多組分miRNA流式螢光平台，不僅有助於microRNA生物功能的基礎研究及臨床診斷技術的發展，而且能夠很容易拓寬至其它生物分子的檢測，因而具有廣泛的用途。
結題摘要
MicroRNA調控細胞的分化是一個複雜的過程，而多種microRNA的同時檢測是解釋其生物功能的基礎，也是目前臨床診斷技術的熱點。近年來快速發展的流式螢光技術，不僅具有以往微陣列晶片高通量特性，且操作簡單、重複性好、靈敏度高，特別適合於一份微量標本，多項指標的快速檢測。基於課題組發表在2014年《Analytical Chemistry》的工作，本項目致力於藉助多种放大平台來進一步提高前期構建方法的檢測靈敏度，旨在為將來套用於臨床真實樣本的靈敏準確檢測奠定基礎。課題研究基本按照標書計畫進行並拓展，首先構建了兩種基於鏈霉親合素放大的多組分miRNA流式螢光檢測技術，隨後借用了酶放大平台來提高流式螢光檢測技術的檢測靈敏度，構建了基於DSN和TdT的雙重信號放大型三組分miRNA流式螢光檢測技術和基於核酸外切酶保護的多組分miRNA流式螢光檢測技術。最後進一步致力於保證檢測靈敏度的前提下，避免檢測系統中採用酶的新方法設計，先後構建了基於模板識別和通用報告探針的miRNA雙組份流式螢光檢測技術，基於催化髮夾自組裝的miRNA多組分流式螢光檢測方法和無標記空間位阻型三組分miRNA流式螢光適配體技術，並進而拓寬至TdT加尾的兩種病原體核酸檢測、滾環轉錄擴增型miRNA適配體檢測以及糖苷酶和轉錄因子的多組分流式螢光檢測。基於該項目，合計培養3名博士研究生和2名碩士研究生，目前已撰寫標註該項目的學術研究論文5篇，其中4篇已發表，1篇正在投稿中。部分研究內容曾在2017年第十七屆亞洲化學大會、2017年藥物分析國際研討會、2018年中國化學會第13屆全國分析化學年會、2019 中日韓分析化學研討會、2019年中國藥學會藥物分析專業委員會學術年會等會議上介紹。以上擬構建的新型多組分miRNA流式螢光檢測技術，不僅有助於microRNA生物功能的基礎研究及臨床診斷技術的發展，而且能夠很容易拓寬至其它生物分子的檢測，因而具有廣泛的用途。
