《多功能蛋白PSF抑制IL-4/STAT6轉錄活性的分子機制》是依託天津醫科大學，由楊潔擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：多功能蛋白PSF抑制IL-4/STAT6轉錄活性的分子機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：楊潔
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
IL-4/STAT6異常活躍及靶蛋白IgE過度分泌與I型超敏反應密切相關，因此研究IL-4/STAT6調控IgE基因轉錄和表達機制有重要意義。本課題組一直從事相關研究，發現了STAT6轉錄激活複合物的組成成員，近期又發現IL-4刺激後，可誘導多功能蛋白PSF（多聚嘧啶區結合蛋白相關剪接因子）與STAT6結合，過量表達PSF可抑制STAT6介導的IgE基因轉錄。本項目在前期基礎上，利用EMSA、ChIP、免疫共沉澱、免疫螢光等技術深入探討IL-4刺激後PSF與STAT6在細胞內結合、定位分布及磷酸化修飾情況；PSF抑制STAT6/IgE基因轉錄的機制：作為抑制因子招募HDAC（組蛋白去乙醯化酶）到STAT6轉錄複合物上，通過（組）蛋白去乙醯化修飾改變染色質結構；還是直接與STAT6的DNA結合片段結合，阻止STAT6識別啟動子DNA。另外，深入探討PSF與STAT6有效結合的功能片段。
結題摘要
在本項目前期的研究工作中，我們通過質譜分析技術發現了一個這樣的轉錄抑制因子： PSF (PTB-associated splicing factor, 多聚嘧啶區結合蛋白相關剪接因子)，它是 Hela 細胞受到IL-4刺激後，因為與 GST-STAT6-TAD結合而被我們發現的。在此項目的研究過程中，我們發現PSF與STAT6蛋白呈現共定位，通過STAT6的TAD結構域與STAT6 蛋白相互結合，該結合是 PSF 蛋白發揮對 IL-4/STAT6 基因轉錄抑制作用的結構基礎。IL-4 誘導 STAT6 與 PSF 酪氨酸磷酸化是二者結合的先決條件。蟲螢光素酶檢測發現，PSF 負調控STAT6 基因轉錄活性。進一步的結果顯示， PSF負調Ige基因的轉錄水平。 染色質免疫沉澱實驗發現細胞內不同表達水平的 PSF 影響 STAT6 與 Ige啟動子結合能力。由此我們得出以下結論，IL-4 刺激後 PSF 對 STAT6 信號傳導通路進行負性調控，即 IL-4刺激後PSF是STAT6通路的轉錄抑制因子，且該抑制作用具有IL-4配體的依賴性。
