《塵蟎ppLase協同誘導哮喘發病的免疫學機理研究》是依託深圳大學，由劉志剛擔任項目負責人的重大研究計畫。
基本介紹
- 中文名：塵蟎ppLase協同誘導哮喘發病的免疫學機理研究
- 項目類別：重大研究計畫
- 項目負責人：劉志剛
- 依託單位：深圳大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
我們前期研究結果顯示，塵蟎ppLase無免疫反應性，但具有誘導Th2或Th17型免疫反應的功能。那么，塵蟎ppLase在哮喘發病中的作用及其相關機制是什麼？結合文獻報導，我們假設塵蟎ppLase可能直接或間接作用於樹突狀細胞（DC），上調其表面協同刺激分子或內部免疫調節因子IRF4的表達，誘導Th0細胞向Th2細胞分化，並提出塵蟎ppLase在哮喘致病中的“協同效應假說”。本課題將開展以下研究①建立哮喘動物模型,觀察ppLase在粉塵蟎主要過敏原誘導哮喘中的協同作用；②分離各組動物肺組織中的DC和上皮細胞，探討粉塵蟎ppLase是直接作用於DC還是通過改變上皮細胞/微環境從而活化DC，誘導Th2細胞極化；並進一步探討DC細胞活化的具體機制。本項目將闡明塵蟎ppLase在哮喘致病機制中的“協同效應假說”，並且探討哮喘與肺組織免疫反應的內在聯繫和區域免疫學特性，為哮喘的防治提供新的理論依據。
結題摘要
在近幾十年過敏反應學研究中，人們只重視塵蟎過敏原（Der f1-33）的研究，而對塵蟎眾多的非過敏原蛋白從未予以關注。本研究在運用蛋白組學技術對粉塵蟎進行研究基礎上，首次選擇粉塵蟎酞脯氨酸異構酶（Pplase）進行分子生物學研究，並對其在過敏反應中的作用機制進行研究。 結果顯示，克隆表達純化後的粉塵蟎Pplase蛋白經臨床皮膚試驗和sIgE檢測證實不是塵蟎過敏原組份（不具有過敏原性）。利用PBS、Pplase、OVA和Pplase/OVA分別免疫小鼠，建立過敏性哮喘模型，通過對氣道高反應性（AHR）以及肺泡灌洗液、肺組織病理變化進行檢測，我們發現單獨Pplase組與對照組相比沒有顯著性差異，而Pplase/OVA組明顯高於OVA組。結果表明，塵蟎非過敏原蛋白Pplase增強了OVA誘導的氣道過敏反應並進一步促進Th2細胞極化（具有協同效應）。 我們進一步觀察Pplase如何作用於DC細胞促進Th0細胞向Th2細胞的分化偏移，將DC2.4作為研究對象，利用RT-PCR和流式細胞儀檢測了CD80、CD40、IRF4、和TNF-α的表達水平，發現Pplase能夠顯著增強CD80、IRF4、和TNF-α的表達，但對於CD40的表達並無影響。利用western blot對IRF4蛋白進行檢測，發現Pplase能夠顯著上調IRF4得表達。利用TLR4抑制劑和抗TLR2抗體阻斷相應通路，發現在TLR4抑制劑存在的情況下，TNF-α的表達明顯被抑制，而在抗TLR2抗體存在的情況下，其與對照組相比並無顯著性差異。結果表明Pplase最主要通過TLR4調控DC的功能。此外，我們通過免疫細胞過繼實驗證明Pplase通過作用DC增強過敏反應。 本研究首次提出塵蟎非過敏原蛋白（Pplase）在過敏性疾病發病中的“協同/疊加效應假說”，為過敏性疾病的發病機制和防治提供新的理論依據。
