《基於SiRNA抑制瘧原蟲入侵紅細胞的研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由雷俊川擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：基於SiRNA抑制瘧原蟲入侵紅細胞的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：雷俊川
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
瘧疾是一種嚴重危害人類健康的寄生蟲性傳染病，全球每年死亡人數多達100多萬。瘧原蟲是瘧疾的病原體，其中惡性瘧原蟲危害最嚴重，瘧原蟲裂殖子入侵紅細胞是引起臨床症狀的關鍵步驟和先決條件。本研究擬套用SiRNA抑制惡性瘧原蟲裂殖子入侵紅細胞的兩個關鍵分子，即裂殖子表面蛋白1（MSP1）和頂端膜抗原1(AMA1)的表達，分別從分子水平、光學顯微鏡和電子顯微鏡水平來分析抑制這兩個分子後對瘧原蟲的影響。期望通過阻斷瘧原蟲裂殖子入侵紅細胞，抑制裂殖子增殖。為控制當前開始出現廣泛抗藥性的瘧原蟲提供一種新的治療思路和策略。本研究亦將為瘧疾後基因組時代，研究新基因功能打下重要的理論和實踐基礎。
結題摘要
本項目原計畫以惡性瘧原蟲入侵紅細胞過程中的關鍵分子AMA1和MSP1為靶點，設計合成同時干擾這兩個分子表達的siRNA，探討能否通過siRNA干擾降低瘧原蟲的感染率。第一年度的研究結果顯示原設計的siRNA轉染體外培養的惡性瘧原蟲後，未能觀察到其對瘧原蟲感染率的抑制作用，也未檢測到該siRNA對AMA1和MSP1分子表達的下調作用。分析原因可能由於以AMA1和MSP1為共同靶點設計siRNA的可供選擇範圍較窄，造成靶點選擇不當。同時，候選的siRNA分子應該首先通過可靠的生物學實驗確定其對靶蛋白的干擾效果。由於瘧原蟲是否存在經典的RNA干擾機制仍存在爭議，其在進化過程中是否存在類似RNA干擾的代償機制也並清楚。因此，有必要嘗試以siRNA表達載體替代體外合成siRNA分子，以充分利用瘧原蟲可能存在的RNA干擾代償機制或旁路途徑。基於以上結果分析，我們重新設計若干針對瘧原蟲AMA1分子的siRNA表達載體，首先以293T細胞為模型篩選出對AMA1過表達有確切干擾效果的三個siRNA表達載體，然後將這三種siRNA表達載體通過電穿孔方式轉染體外同步化培養的瘧原蟲.通過realtime-PCR和Western Blot實驗驗證siRNA對AMA1表達的干擾效果，結果顯示siRNA表達載體AMA1i-148對惡性瘧原蟲AMA1具有明顯的干擾作用，AMA1的mRNA和蛋白水平均有下降，該結果為瘧原蟲可能存在RNA干擾機制或者是其代償機制提供了新的佐證。相關研究結果我們已經投遞至Molecular Biology Reports雜誌，目前正在審稿中。
