《基於S期激酶相關蛋白2的抗腫瘤多肽藥物篩選與套用》是依託南昌大學，由黃璇擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：基於S期激酶相關蛋白2的抗腫瘤多肽藥物篩選與套用
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：黃璇
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
惡性腫瘤是嚴重危害人類健康的疾病，然而，目前臨床上尚缺乏有效的治療藥物。泛素是一類小分子蛋白質，它在泛素激活酶、結合酶、連線酶和降解酶等作用下，對靶蛋白進行特異性修飾並使之降解，從而參與細胞周期、基因表達、轉錄調節等幾乎一切生命活動的調控。研究表明，蛋白泛素化過程在腫瘤、心血管疾病等的發病中起重要作用。因此，參與蛋白泛素化過程的多種蛋白分子已成為新藥研發的靶點。本課題將以S期激酶相關蛋白2（Skp2，一種E3泛素連線酶）為靶點，利用酵母雙雜交技術在我們已構建好的人源化肽適配體文庫中篩選具有抗腫瘤作用的特異性肽適配體，觀察其對多種腫瘤細胞增殖、遷移、侵襲等的影響以確定肽適配體的抗腫瘤作用，同時還將檢測Skp2底物的蛋白泛素化水平以闡明肽適配體抗腫瘤的作用機制。此外，在異體種植瘤裸鼠模型中研究肽適配體對種植瘤生長的影響，以進一步明確其抗腫瘤作用，從而為抗腫瘤藥物研發提供實驗依據。
結題摘要
惡性腫瘤是嚴重危害人類健康的疾病，然而，目前臨床上尚缺乏有效的治療藥物。泛素是一類小分子蛋白質，它在泛素激活酶、結合酶、連線酶和降解酶等作用下，對靶蛋白進行特異性修飾並使之降解，從而參與細胞周期、基因表達、轉錄調節等幾乎一切生命活動的調控。研究表明，蛋白泛素化過程在腫瘤、心血管疾病等的發病中起重要作用。因此，參與蛋白泛素化過程的多種蛋白分子已成為新藥研發的靶點。原癌基因SKP2，即S期激酶相關蛋白，是一種E3泛素連線酶，通過對多種靶蛋白尤其是抑癌基因的泛素化降解作用參與細胞周期的調控，與腫瘤的發生、發展及預後密切相關。本課題以Skp2為靶點，利用酵母雙雜交系統從構建好的人源化肽適配體文庫中成功篩選到十一個與之相互作用的肽適配體。GST Pull-down實驗證實它們能直接結合Skp2。通過檢測不同腫瘤細胞中Skp2及其底物的表達情況，確定A549細胞為最適肽適配體抗腫瘤作用研究的體外細胞系。免疫印跡實驗發現肽適配體6-1能顯著提高細胞內源p21的表達量，而23-5能提高細胞內源p21和p27的表達量，提示它們可能抑制Skp2與底物結合；細胞周期實驗結果進一步顯示6-1和23-5確實增加了G2/M期細胞比率，與下調Skp2表達的作用一致。因此，我們在多種腫瘤細胞中深入驗證這些肽適配體的抗腫瘤作用，最終證實23-5具有廣譜的抗腫瘤作用。後期，我們將該肽適配體進一步改造，促進其穿膜能力，並在異體種植瘤裸鼠模型中進行體內實驗，評估肽適配體23-5對種植瘤生長、遷移和侵潤的影響。綜上所述，本研究成功篩選到能特異性抑制Skp2蛋白與底物結合的人源肽適配體23-5，通過阻斷抑癌蛋白p21和p27的降解而顯著抑制腫瘤細胞的生長和增殖，有望成為新一代無細胞毒性且特異性針對原癌基因SKP2的多肽抗腫瘤藥物，為抗腫瘤藥物研發提供新的研究方向，並為腫瘤的臨床診療奠定良好的實驗基礎。
