《基於PDZ結構域的NR2B表達調控在坐骨神經痛慢性化中的作用》是依託南京大學，由顧小萍擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：基於PDZ結構域的NR2B表達調控在坐骨神經痛慢性化中的作用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：顧小萍
- 依託單位：南京大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
坐骨神經痛是常見的慢性疼痛性疾病。我們前期研究發現：脊髓背角含NR2B亞單位的NMDA受體上調在包括坐骨神經痛在內的多種疼痛中起重要作用；NR2B在突觸後膜的上調與其合成和轉運增多以及內化減少密切相關。有離體研究表明NR2B依賴驅動蛋白KIF17和支架蛋白複合體（CASK-Mint1-Velis）轉運到樹突末端；而突觸後密度蛋白PSD95 與NR2B的ESDV模序結合，將促進NR2B內化模序YEKL Y1472位點的磷酸化，抑制NR2B的內化。本研究採用激酶抑制劑、基因敲除、PDZ結構域小肽抑制劑等方法，通過行為學、免疫共沉澱、雷射共聚焦、電生理等技術，探討KIF17-Mint1PDZ1-NR2B轉運通路和PSD95 PDZ1/2-ESDV-YEKL信號介導的NR2B內化在坐骨神經痛慢性化進程中的作用，並為以PDZ結構域為靶點，調控NR2B在突觸後膜表達為目標的慢性疼痛治療提供理論依據。
結題摘要
坐骨神經痛是臨床常見的慢性疼痛，我們前期研究發現脊髓背角內突觸後膜含NR2B的NMDA受體上調在多種疼痛中起重要作用。NR2B在突觸後膜的表達與其合成和轉運增多以及內化減少密切相關，NR2B到樹突末端的轉運依賴於驅動蛋白KIF17；NR2B的內化與其ESDV模序和突觸後密度蛋白PSD95結合有關，可磷酸化NR2B內化模序YEKL Y1472位點，抑制其內化。本研究採用激酶抑制劑、構建小肽等方法，通過行為學、Western-blot等技術，調控NR2B與PDZ結構域在慢性疼痛中的作用。結果提示：①鞘內注射大麻素受體2激動劑JWH015可以顯著改善穩定期的骨癌痛，呈劑量依賴性，預先給予拮抗劑AM630後JWH015的抗痛敏作用降低；NR2B的mRNA與痛行為學變化一致。②CCD大鼠第7天鞘內注射Cdk5抑制劑Roscovitine，可緩解坐骨神經痛，脊髓NR2A mRNA與疼痛行為學一致，而NR2B無明顯差異。③腹腔注射GSK-3β的抑制劑Licl或鞘內注射右旋美托咪定可抑制NR2B磷酸化，分別減輕坐骨神經痛行為和瑞芬痛覺過敏。④鞘內給予棕櫚醯化抑制劑2-BP均能夠緩解CCD大鼠痛敏，並降低脊髓NR2B棕櫚醯化。⑤骨癌痛小鼠5-14天脊髓KIF17、mLin10、CaMKⅡ、NR2B表達升高，重複鞘內注射NR2B拮抗劑艾芬地爾可緩解痛敏，並降低蛋白；Myr-RC-13可破壞KIF17與mLIN相互作用，鞘內注射後可降低脊髓KIF17和NR2B表達，緩解骨癌痛；CaMKⅡ拮抗劑KN93鞘內注射可提高痛閾，降低KIF17和NR2B，提示CaMKⅡ參與調控KIF17/NR2B的轉運或表達。⑥在小鼠骨癌痛的形成及維持過程中，脊髓水平NR2B、PSD95表達增加；鞘內注射小肽Myr-NR2B9c，選擇性抑制NR2B與PSD95間相互作用後，骨癌痛緩解，同時脊髓NR2B、PSD95表達降低。⑦鞘內給予CaMKⅡ抑制劑m-AIP後能緩解CCI大鼠的疼痛和被動迴避行為障礙，降低海馬CaMKⅡ、NR2B表達；脊髓和前扣帶回水平的CaMKⅡ-CREB信號通路還參與CCI大鼠疼痛情緒，鞘內注射KN93及m-AIP，可改善CCI大鼠痛覺辨識及疼痛相關負性情緒。該課題為以PDZ結構域為靶點，揭示NR2B磷酸化、棕櫚醯化等修飾及其轉運、內化等在疼痛中的機制，為慢性疼痛治療提供理論依據。
