基於納米螢光探針的免疫層析檢測法的研究

《基於納米螢光探針的免疫層析檢測法的研究》是依託南昌大學，由賴衛華擔任項目負責人的地區科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：基於納米螢光探針的免疫層析檢測法的研究
• 項目類別：地區科學基金項目
• 項目負責人：賴衛華
• 依託單位：南昌大學

項目摘要

建立快速靈敏的食品安全現場檢測方法是目前國內外共同關注的重點和熱點。本項目擬在前期工作的基礎上，創新性地以納米螢光探針為檢測工具，探索建立一種速度快、靈敏度高的食品安全現場檢測方法。通過製備高質量的納米螢光微球，對其表面進行修飾後,將其與高親和力、高特異性、高效價的抗鹽酸克侖特羅的單克隆抗體進行有效偶聯，摸索到既可以保持納米螢光微球的螢光強度，同時又保持單克隆抗體生物活性的有效的偶聯方法。以免疫層析技術為載體，以競爭抑制為檢測原理，實現鹽酸克侖特羅殘留的快速、高靈敏度現場檢測,並推廣至食品安全快速檢測的其它領域。基於納米螢光探針的免疫層析檢測法，有望解決食品安全現場檢測方法靈敏度偏低，使用範圍受限制的技術瓶頸，為豐富和最佳化我國食品安全快速檢測方法提供新的思路，為改善和提高我國食品安全質量提供有力的技術支撐。

結題摘要

克侖特羅是一種擴張氣管治療哮喘的藥，因為它可以提高動物的生長速度和瘦肉率，因此曾經被廣泛套用於畜牧生產中。然而食用殘留克侖特羅的動物性食物對人體有害，我國和歐盟都已明令禁止在畜牧生產中使用克侖特羅。目前克侖特羅常用的檢測方法有液／質聯用法 、氣／質聯用法和酶聯免疫吸附法。雖然這些方法的靈敏度較高，但檢測時間較長，需要熟練的操作人員和複雜的儀器設備。以膠體金為標記物的免疫層析法具有一步加樣、便捷、結果判斷直觀、經濟、不需特殊設備的特點。本課題組在前期工作中成功建立了克侖特羅膠體金檢測方法。然而這種方法的靈敏度較低，從而限制了其在食品安全領域的套用。在本研究中，我們選擇螢光微球作為標記物，以建立一種靈敏度更好的免疫層析方法。通過碳二亞胺法，螢光微球表面的羧基與抗克侖特羅的單克隆抗體結合，套用掃描電鏡、螢光分光光度計、納米粒度儀和凝膠電泳對其進行表征並提示偶聯狀況。通過螢光微球試紙條讀取儀對試紙條的檢測線（T線）和質控線（C線）的螢光強度進行掃描，對所製備的螢光微球免疫層析試紙條進行螢光強度動力學分析。同時，樣品的加樣方式也進行了比對，一種是直接將樣本加到螢光微球免疫層析試紙條的加樣孔中，另一種是在酶標孔中預先加入螢光微球抗體複合物，加入樣本充分混合後再加到螢光微球免疫層析試紙條的加樣孔中。結果顯示，基於納米螢光探針的免疫層析T線和C線的螢光強度在55分鐘內都持續增強，T/C比在30分鐘內可達到平衡。以T/C比讀數，在酶標孔中加樣，不僅可以提高螢光微球免疫層析試紙條的靈敏度，而且可以減低其變異係數。最佳化條件後，試紙條的IC50值為0.12 ng/ml，在豬尿中的最低檢測限為0.01 ng/mL，與酶聯免疫吸附法的結果一致，從而成功地建立了克侖特羅殘留的快速、高靈敏度的現場定量檢測方法。