基於新型體外胎盤屏障模型的HBV宮內傳播機理研究

《基於新型體外胎盤屏障模型的HBV宮內傳播機理研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由張磊擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：基於新型體外胎盤屏障模型的HBV宮內傳播機理研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：張磊
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

隨著B肝疫苗的普及套用，B型肝炎病毒(HBV)的水平傳播已經得到了明顯的控制，但對HBV宮內傳播卻缺乏有效的預防措施，宮內傳播必將是未來HBV流行的主要途徑。我們既往研究表明，維繫母親與胎兒的紐帶-胎盤組織，尤其是滋養層細胞對不同HBV基因特徵株的選擇性通過和啟動先天性免疫，與發生HBV宮內感染起著關鍵作用。本課題擬基於HBV宮內感染佇列的病毒學資料和新生兒HBV感染情況等隨訪調查結果，研究發生宮內感染的HBV病毒基因特徵，探索HBV宮內感染和病毒變異之間規律；並以我們自主培養的一株永生化人早孕滋養細胞構建新型體外胎盤屏障模型（PCB-HPT），再以滋養層細胞上Toll樣受體中TLR9為切入點，套用RNA干擾技術，探索滋養層細胞中TLR9在胎盤滋養細胞針對不同HBV基因特徵株所誘導的免疫應答差異，以期闡明HBV宮內感染的免疫機制，為控制HBV宮內傳播提供依據。

結題摘要

本項目從巨觀人群研究和微觀體外胎盤屏障模型研究著手，探討了HBV宮內傳播發生的相關因素。主要結果有：①首次建立和鑑定新型體外胎盤屏障研究模型PCB-HPT模型，完整屏障模型維持時間可達24~36h，屏障模型具有完整性和極化性。②首次建立TLR9基因抑制的PCB-HPT模型，屏障模型可維持12~16小時，屏障模型具有完整性和極化性。③基於胎盤屏障模型的HBV感染試驗發現：HBV高滴度病毒攻擊12小時可進入胎盤屏障的第一層細胞-滋養細胞，屏障在受病毒攻擊後存在完整性被破壞的現象。④TLR 9在宮內傳播中作用的研究發現：正常胎盤組織中TLR 9僅表達於滋養細胞，HBsAg陽性產婦胎盤組織中的滋養層細胞、間質細胞和絨毛毛細血管內皮細胞都有 TLR9表達；且發生宮內感染的胎盤組織較未發生宮內感染者TLR 9的表達更強、更廣泛。同時，發生HBV宮內感染的產婦血清中TLR 9水平顯著高於發生宮內隱匿性感染和未發生宮內傳播的產婦，提示孕婦外周血中的HBV可能激活和增強胎盤細胞的TLR 9的表達，TLR 9 表達水平越高其發生宮內感染機率越高。⑤人群研究中發現：283例HBsAg陽性產婦所生的287例新生兒中有26例HBsAg為陽性，即HBV宮內感染率達9.06%，有124例新生兒HBsAg為陰性且HBV DNA為陽性，即HBV宮內隱匿性感染率高達43.21%。⑥HBsAg陽性產婦以HBV C型為主，B型和C型發生宮內傳播機率無明顯差異。⑦HBsAg陽性產婦中血清型特徵以小三陽為主，但是大三陽產婦發生宮內感染機率顯著高於其他類型HBsAg陽性產婦。其中產婦HBV DNA載量、產婦家族患有B肝的家族史和新生兒HBV DNA載量與HBV宮內感染髮生有顯著關係。⑧在病毒序列分歧時間分析中發現，宮內感染可以發生在孕期的各個階段，主要發生在妊娠中晚期。本項目研究結果顯示產婦體內B肝病毒無論是B基因型還是C基因型，隨著病毒滴度增加，對胎盤屏障的攻擊、破壞可能性增加；並且隨著妊娠時間增加，發生宮內傳播機率也增加，因此，HBV宮內感染大多發生在妊娠中晚期；此外，研究發現TLR 9是預測是否發生HBV宮內感染的一個潛在指標，為宮內感染早期預防與發現提供了理論依據。