《基於小菜蛾抗菌肽表達調控的MicroRNAs及其功能研究》是依託華南農業大學，由金豐良擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：基於小菜蛾抗菌肽表達調控的MicroRNAs及其功能研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：金豐良
- 依託單位：華南農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
MicroRNAs(miRNAs)是生物體內一類新型保守的非編碼單鏈小分子RNA，通過抑制或降解功能基因的mRNA,參與細胞生長、發育等生命活動的調控過程。為探索miRNAs 對昆蟲抗菌肽表達的調控，本項目擬以小菜蛾為研究對象：構建miRNA 文庫及深度測序，鑑定小菜蛾體內miRNAs的種類和數量；基因晶片篩查調控小菜蛾抗菌肽表達的miRNAs（AMP-miRs），利用活體過量表達或RNAi干擾AMP-miRs在小菜蛾體內的表達，運用定量RT-PCR、Northern blot檢測小菜蛾抗菌肽及相關免疫基因的表達差異，闡明AMP-miRs在小菜蛾抗菌肽產生過程中的功能；利用螢光素酶載體系統和RNAi技術明確AMP-miRs調控的靶標基因。通過上述研究，闡明AMP-miRs調控小菜蛾抗菌肽表達的機理。研究結果不僅有助於深入理解害蟲的免疫調控機制，也為通過調控害蟲的免疫系統來控制害蟲奠定基礎。
結題摘要
為闡明microRNA對抗菌肽表達的調控機理，本項目利用RNA-Seq測定了玫煙色棒束孢Isaria fumosorosea，綠僵菌素Destruxin, Bacillus thuringiensis (Bt)處理小菜蛾後不同時間的轉錄組和小RNA文庫，篩選了小菜蛾免疫外界微生物的免疫相關microRNA和mRNA，並對microRNA和mRNA的關聯性進行了動態分析，預測了其靶標相關性，初步確定了免疫相關microRNA的靶標及其在免疫系統中的功能；並利用RNAi技術明確了部分microRNA靶標的功能。具體結果如下： 1、 篩選了miR-2, miR-9a, miR-745, miR-7b,和miR-2767等主要調控Toll信號通路產生的抗菌肽及酚氧化酶級聯反應來抵禦I. fumosorosea的侵染的microRNA，qRT-PCR明確了其對I. fumosorosea侵染表達時效性。 2、 篩選並確定了miR-276主要調節ßGBP和Relish的表達，從而調控酚氧化酶級聯反應和Imd信號通路產生的抗菌肽來免疫Destruxin的毒性，qRT-PCR明確了其對Destruxin免疫表達時效性。 3、 確定了mir-317直接參與調控小菜蛾抗菌肽Gloverin1（Px_105389810）基因的表達，miR-1調控Lysozyme，miR-263參與lectin的表達來調控小菜蛾免疫Bt的侵染。螢光素酶系統明確了其相互靶標關係。 4、 RNAi明確了抗菌肽cecropin和gloverin主要受Toll通路調控，cecropin和gloverin分別對綠僵菌和Bt具有殺菌活性；lectin可被細菌誘導且蛋白對Bt侵染具有防禦作用。 通過本項目研究發表7篇SCI文章（IF≥4,3篇），2篇中文核心期刊，申請專利2個，培養碩士研究生11名，博士3名，博士後1名。
