《基於大鼠胚胎幹細胞建立重症免疫缺陷基因敲除大鼠》是依託浙江大學，由肖磊擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：基於大鼠胚胎幹細胞建立重症免疫缺陷基因敲除大鼠
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：肖磊
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Rag2及γc聯合敲除小鼠具有嚴重的免疫缺陷，不能形成成熟的T細胞、B細胞及NK細胞，但卻具有有功能的胸腺，因此移植了人造血幹細胞的Rag2-/-γc-/-小鼠，由於重症聯合免疫缺陷而對人類的移植細胞高度容受，且其外周血能夠檢測到人類T細胞和B細胞，是研究人類造血幹細胞功能、免疫應答功能、腫瘤學、幹細胞、再生醫學等研究的理想模型。Rag2-/-γc-/-小鼠已用於腫瘤學、HIV等研究，而Rag2-/-γc-/-重症免疫缺陷大鼠模型尚未建立，免疫缺陷大鼠具有移植瘤大、取血量多、可行某些外科小手術等優點，因此比免疫缺陷型小鼠具有優越性。本項目擬基於大鼠胚胎幹細胞（ESC）結契約源重組技術及TALENs打靶技術建立Rag2和γc雙基因敲除的免疫缺陷大鼠，用於幹細胞、再生醫學及腫瘤學的研究。本實驗室多年從事幹細胞與轉基因研究，已建立了具有嵌合能力的大鼠ESC，因此本項目是可行的。
結題摘要
本項目擬基於大鼠胚胎幹細胞（ESC）結契約源重組技術及TALENs 打靶技術建立Rag2 和γc 雙基因敲除的免疫缺陷大鼠，用於幹細胞、再生醫學及腫瘤學的研究。課題組建立了大鼠基因敲除系統，我們利用TALEN技術敲除大鼠microRNA mir-23b基因，在動物水平的實現較高的打靶效率。此外，課題組系統地比較分析了豬核移植胚胎移植過程中的各項參數對產生克隆豬效率的影響，從而提出了最佳化的技術參數。結合ZFN打靶技術，建立了豬GGTA1敲除的細胞系，進而以該細胞係為核供體結合SCNT技術建立了GGTA1基因敲除的克隆豬；利用TALENs技術在人胚胎幹細胞表面敲除了編碼HLAⅠ類分子β鏈的重要基因β2m；利用TALENs技術在人胚胎幹細胞表面敲除了調控HLAⅠ類分子表達的重要基因TAP1和TAPBP；利用TALEN技術高效地在人類胚胎幹細胞內靶向敲除了MHC II類轉錄激活子(CIITA) ，HLAⅠ類和II類分子缺失的人類胚胎幹細胞可用於免疫機制的研究，而該低免疫原性的細胞系也有望用作器官移植的供體。
