《基因操作技術》是2010年化學工業出版社出版的圖書，作者是張虎成。
基本介紹
- 書名：基因操作技術
- 作者：張虎成
- ISBN：9787122078605
- 定價：28.00元
- 出版社：化學工業出版社
- 出版時間：2010年9月1日
- 開本：16開
內容簡介,目錄,
內容簡介
《基因操作技術》一書為國家示範性高職院校一線教師和企業專家共同開發的教改成果教材。《基因操作技術》按照DNA重組技術的操作程式來安排實驗，即從核酸的提取→目的基因的製備→體外DNA的重組(酶切與連線)→重組DNA分子引入受體細胞→轉化子的篩選→重組DNA分子的鑑定等步驟編排成一個綜合性大實驗。在這個綜合性實驗中，每一步實驗既相對獨立又與下一步實驗緊密相連。通過這些實驗，學生可以熟練掌握分子生物學最基本的技術，並對DNA重組技術有一個比較全面而系統的概念。《基因操作技術》一書中同時穿插了分子生物學其他必備的實驗，以便培養學生比較全面的分子生物學實驗技能。《基因操作技術》分為6個項目，每個項目由若干個任務組成，並且有“必備知識”作為任務的理論補充，“拓展知識”可以擴展學生的知識面，“項目思考”中設計的問題有助於培養學生獨立思考能力和創新意識。
本書可作為高職高專生物技術相關專業的教材，也可供相關技術人員參考。
目錄
項目一 質粒pMD18-T-EGFP的分離、純化和鑑定
一、項目介紹
二、學習目標
三、項目實施
任務一 創建和諧包容性的工作環境
任務二 清洗、包紮常用玻璃器皿和耗材
任務三 配製並滅菌各種濃度單位的溶液
任務四 創建遺傳信息流示意圖
任務五 鹼裂解法分離提取質粒pMD18-T-EGFP及濃度測定
任務六 瓊脂糖凝膠電泳鑑定質粒pMD18-T-EGFP
任務七 細菌基因組DNA提取及質量檢測
四、項目思考
五、必備知識
（一）基因工程的發展簡史
（二）基因工程實驗規範
（三）溶液濃度的計算與換算
（四）生物學遺傳信息流
（五）DNA的結構
（六）核酸的理化性質
（七）乳糖操縱元
（八）載體（一）
六、拓展知識
（一）基因組大小與基因數量
（二）基因操作對人類生存環境的影響
（三）真核生物DNA的提取
（四）真核基因組DNA的製備技術
項目二 綠色螢光蛋白基因(egfp)轉錄產物RNA的提取
一、項目介紹
二、學習目標
三、項目實施
任務一 總RNA的提取及含量測定
任務二 mRNA的提取與純化
任務三 RNA瓊脂糖凝膠電泳
任務四 Northern blot
四、項目思考
五、必備知識
(一)RNA操作注意事項
(二)RNA的空間結構和功能
(三)mRNA的合成與加工
六、拓展知識
(一)植物病毒的RNA提取
(二)動植物組織mRNA提取
(三)兔肝RNA的製備
(四)人體細胞總RNA和mRNA的提取
項目三 體外擴增目的基因——綠色螢光蛋白基因（egfp）
一、項目介紹
二、學習目標
三、項目實施
任務一 以DNA為模板擴增綠色螢光蛋白基因（egfp）——PCR
任務二 以mRNA為模板反轉錄擴增綠色螢光蛋白基因——RT-PCR
任務三 實時螢光系統通過反轉錄定量（RT-qPCR）對基因表達進行分析
任務四 cDNA文庫構建技術（一）——磁珠法提純mRNA
任務五 cDNA文庫構建技術（二）——cDNA鏈的反轉合成
四、項目思考
五、必備知識
（一）DNA的生物合成
（二）RNA的生物合成
（三）DNA聚合酶的類別和性質
（四）其他工具酶
（五）PCR技術及其在基因克隆中的套用
（六）PCR產物的克隆
六、拓展知識
（一）巢式PCR
（二）cDNA文庫構建技術
項目四 將綠色螢光蛋白基因（egfp）克隆到載體上
一、項目介紹
二、學習目標
三、項目實施
任務一 利用內切酶對載體和基因（egfp）進行酶切
任務二 酶切片段的脫磷技術
任務三 DNA片段的回收技術
任務四 基因的重組連線技術
任務五 cDNA文庫構建技術（三）——cDNA的連線、包裝及轉染
任務六 RACE技術擴增構建全長cDNA文庫
四、項目思考
五、必備知識
（一）限制性內切酶分類和催化機制
（二）DNA甲基化酶
（三）DNA連線酶
（四）其他工具酶的催化機制
（五）載體（二）
六、拓展知識
（一）分子標記
（二）RFLP技術
（三）RAPD技術
（四）AFLP技術
（五）SSR技術
項目五 將含有egfp基因的質粒轉化到E.coli中
一、項目介紹
二、學習目標
三、項目實施
任務一 準備溶液及器皿
任務二 感受態細胞的製備及熱激法將質粒轉化到E.coli中
任務三 感受態細胞的製備及電擊法將質粒轉化到E.coli中
任務四 農桿菌轉化植物細胞
任務五 磷酸鈣轉染動物細胞
四、項目思考
五、必備知識
（一）感受態細胞
（二）外源基因導入真核細胞的方法
（三）目的基因的篩選策略
六、拓展知識
（一）基因打靶技術
（二）從基因到基因組
項目六 基因（egfp）及基因產物(EGFP)檢測
參考文獻
一、項目介紹
二、學習目標
三、項目實施
任務一 創建和諧包容性的工作環境
任務二 清洗、包紮常用玻璃器皿和耗材
任務三 配製並滅菌各種濃度單位的溶液
任務四 創建遺傳信息流示意圖
任務五 鹼裂解法分離提取質粒pMD18-T-EGFP及濃度測定
任務六 瓊脂糖凝膠電泳鑑定質粒pMD18-T-EGFP
任務七 細菌基因組DNA提取及質量檢測
四、項目思考
五、必備知識
（一）基因工程的發展簡史
（二）基因工程實驗規範
（三）溶液濃度的計算與換算
（四）生物學遺傳信息流
（五）DNA的結構
（六）核酸的理化性質
（七）乳糖操縱元
（八）載體（一）
六、拓展知識
（一）基因組大小與基因數量
（二）基因操作對人類生存環境的影響
（三）真核生物DNA的提取
（四）真核基因組DNA的製備技術
項目二 綠色螢光蛋白基因(egfp)轉錄產物RNA的提取
一、項目介紹
二、學習目標
三、項目實施
任務一 總RNA的提取及含量測定
任務二 mRNA的提取與純化
任務三 RNA瓊脂糖凝膠電泳
任務四 Northern blot
四、項目思考
五、必備知識
(一)RNA操作注意事項
(二)RNA的空間結構和功能
(三)mRNA的合成與加工
六、拓展知識
(一)植物病毒的RNA提取
(二)動植物組織mRNA提取
(三)兔肝RNA的製備
(四)人體細胞總RNA和mRNA的提取
項目三 體外擴增目的基因——綠色螢光蛋白基因（egfp）
一、項目介紹
二、學習目標
三、項目實施
任務一 以DNA為模板擴增綠色螢光蛋白基因（egfp）——PCR
任務二 以mRNA為模板反轉錄擴增綠色螢光蛋白基因——RT-PCR
任務三 實時螢光系統通過反轉錄定量（RT-qPCR）對基因表達進行分析
任務四 cDNA文庫構建技術（一）——磁珠法提純mRNA
任務五 cDNA文庫構建技術（二）——cDNA鏈的反轉合成
四、項目思考
五、必備知識
（一）DNA的生物合成
（二）RNA的生物合成
（三）DNA聚合酶的類別和性質
（四）其他工具酶
（五）PCR技術及其在基因克隆中的套用
（六）PCR產物的克隆
六、拓展知識
（一）巢式PCR
（二）cDNA文庫構建技術
項目四 將綠色螢光蛋白基因（egfp）克隆到載體上
一、項目介紹
二、學習目標
三、項目實施
任務一 利用內切酶對載體和基因（egfp）進行酶切
任務二 酶切片段的脫磷技術
任務三 DNA片段的回收技術
任務四 基因的重組連線技術
任務五 cDNA文庫構建技術（三）——cDNA的連線、包裝及轉染
任務六 RACE技術擴增構建全長cDNA文庫
四、項目思考
五、必備知識
（一）限制性內切酶分類和催化機制
（二）DNA甲基化酶
（三）DNA連線酶
（四）其他工具酶的催化機制
（五）載體（二）
六、拓展知識
（一）分子標記
（二）RFLP技術
（三）RAPD技術
（四）AFLP技術
（五）SSR技術
項目五 將含有egfp基因的質粒轉化到E.coli中
一、項目介紹
二、學習目標
三、項目實施
任務一 準備溶液及器皿
任務二 感受態細胞的製備及熱激法將質粒轉化到E.coli中
任務三 感受態細胞的製備及電擊法將質粒轉化到E.coli中
任務四 農桿菌轉化植物細胞
任務五 磷酸鈣轉染動物細胞
四、項目思考
五、必備知識
（一）感受態細胞
（二）外源基因導入真核細胞的方法
（三）目的基因的篩選策略
六、拓展知識
（一）基因打靶技術
（二）從基因到基因組
項目六 基因（egfp）及基因產物(EGFP)檢測
參考文獻
