嗜水氣單胞菌感染對青魚補體系統激活的影響機制研究

《嗜水氣單胞菌感染對青魚補體系統激活的影響機制研究》是依託湖州師範學院，由劉問擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：嗜水氣單胞菌感染對青魚補體系統激活的影響機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：劉問
• 依託單位：湖州師範學院

項目摘要

青魚是我國淡水養殖四大家魚之一，近年來隨著養殖產量增加，病害問題不斷出現，其中以嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophilia）引起的病害較嚴重。本項目擬採用iTRAQ蛋白質組學方法分析嗜水氣單胞菌感染組和對照組青魚的血清和肝臟，篩選、鑑定差異表達蛋白，並從中篩選出與補體系統激活相關的組分（前期預實驗已篩選出補體C9和補體B因子）。用RACE方法進一步克隆補體C9、補體B因子等基因cDNA全長，實時定量PCR檢測感染過程中補體C9和B因子轉錄水平的表達變化。然後通過原核表達載體構建、表達及抗體的製備，Western blot分析感染過程中補體C9和B因子蛋白水平的表達變化。目前關於嗜水氣單胞菌感染對魚類補體系統激活的影響機制研究，尚未見相關報導。本項目的開展，對闡明嗜水氣單胞菌感染對魚類補體系統激活的影響機制，充實魚類免疫學的基礎數據及有效防控魚類病害具有較大的理論和指導意義。

結題摘要

青魚是我國淡水養殖四大家魚之一，近年來隨著養殖產量增加，病害問題不斷出現，其中以嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）引起的病害較嚴重。本項目採用iTRAQ結合LC-MS/MS技術對嗜水氣單胞菌感染組和對照組青魚的血清和肝臟開展了蛋白質組學研究，篩選、鑑定青魚感染嗜水氣單胞菌後的差異表達蛋白。KEGG通路分析表明，血清和肝臟中的差異表達蛋白均在補體和凝血級聯反應通路富集最為顯著，其中包括補體C1、補體B/C2A、補體B/C2B、補體C3、補體C4等，這些補體蛋白參與了補體活化的3條激活途經（經典途徑、替代途徑和凝集素途徑），在青魚感染嗜水氣單胞菌後均呈明顯下調錶達，提示細菌感染抑制了補體各激活途經，魚體免疫防禦機能下降。採用實時螢光定量PCR方法，從轉錄水平分析了青魚感染嗜水氣單胞菌後不同組織中補體B/C2A、補體C3和補體C9基因表達的變化，結果顯示其轉錄水平與蛋白水平的變化並不完全一致。製備了補體C3的抗體，Western blot分析表明補體C3在血清中的含量最高，青魚感染嗜水氣單胞菌後，補體C3在心臟中的表達下調。免疫螢光組織化學分析結果顯示，青魚感染嗜水氣單胞菌後，補體C3在腎臟中的表達明顯增強。此外，從組織病理學角度闡述了嗜水氣單胞菌感染對青魚不同組織造成的損傷，尤其是腎臟的損傷與上述補體在青魚感染嗜水氣單胞菌後的下調錶達密切相關。本項目的研究結果，對闡明嗜水氣單胞菌感染影響魚類補體系統激活的機制，進一步解析嗜水氣單胞菌的致病機理以及其逃避宿主補體攻擊的機制，對充實魚類免疫學的基礎數據、有效防控魚類病害具有一定的理論和指導意義。