單顆粒水平脂質納米藥物多參數定量表征技術的建立

《單顆粒水平脂質納米藥物多參數定量表征技術的建立》是依託廈門大學，由顏曉梅擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：單顆粒水平脂質納米藥物多參數定量表征技術的建立
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：顏曉梅
• 依託單位：廈門大學

項目摘要

納米藥物，尤其是脂質納米藥物，具有重要的生物醫學套用前景，然而表征技術的匱乏已嚴重阻礙納米醫藥的發展。納米藥物的高度異質性迫切需要發展高通量的單顆粒表征技術。本項目擬利用實驗室創建的超高靈敏流式檢測技術靈敏、快速、多參數、定量分析的獨特性能，通過對單個脂質納米顆粒散射光和多色螢光信號的同時檢測，建立脂質納米藥物的單顆粒水平綜合表征平台，為脂質納米藥物的合成最佳化、質量控制等提供高效、實用的表征技術和方法。將合成靶向型阿黴素脂質體，並以此為模型建立集顆粒粒徑及其分布、顆粒濃度、包封率、載藥量及其分布、表面偶聯抗體密度及其分布等多種指標於一體的脂質納米藥物綜合表征方法；套用於阿黴素梯度載藥和載藥方式的最佳化，並在細胞水平考察單克隆抗體密度、阿黴素載藥量的藥效關係。該項目的順利開展將突破傳統技術僅能對脂質納米藥物的單個參數進行巨觀測定的表征困境，有力地推動納米藥物的研發進程。

結題摘要

脂質納米藥物是目前臨床上最受認可的載藥系統。基於納米藥物固有的高度異質性，需要對其粒徑及其分布、載藥量及其分布、顆粒濃度、藥物包封率、表面偶聯靶向配體數量及其分布等物理、化學性狀進行快速、準確的單顆粒水平表征，以獲得具有統計代表性的數據。我們製備了阿黴素脂質體並以此為模型，利用實驗室自行研製的具有國際領先水平的超高靈敏流式檢測裝置（high sensitivity flow cytometer, HSFCM），通過對單個脂質體散射和螢光信號的同時檢測，藉助粒徑標準球和螢光亮度標準球，建立了脂質納米藥物的粒徑及其分布、載藥量及其分布、顆粒濃度和載藥率的快速、高分辨定量表征方法，檢測速率高達10,000顆粒/分鐘，實現了對商品化阿黴素脂質體Doxoves和gDoxil粒徑和載藥量的快速表征。將靶向疾病組織或腫瘤細胞的配體分子（如抗體、核酸適配體、短肽或特異性配體等）偶聯在納米顆粒的表面是實現納米藥物靶向治療的前提。我們合成了表面偶聯葉酸配體的脂質體，採用螢光標記的葉酸受體作為探針測定脂質體表面可利用葉酸的含量，以粒徑和螢光當量已知的二氧化矽納米顆粒作為標準品，實現了脂質體粒徑和表面葉酸含量的同時測定，建立了葉酸脂質體表面可利用配體密度及其分布的定量表征方法。採用傳統流式細胞儀考察了配體密度對脂質體與細胞結合能力的影響，得到脂質體的最佳配體密度。此外，我們還考察了葉酸脂質體製備方法、PEG長度等參數對脂質體表面可利用配體數量的影響。結合免疫螢光標記，我們將該方法拓展至以轉鐵蛋白和Her2單克隆抗體分別作為靶向配體的脂質體表面配體含量的表征，並建立了一種表征單個脂質體表面總蛋白含量及可利用配體含量的表征方法，可測定脂質體表面有效配體的比例。最後，我們製備了以轉鐵蛋白為靶向基元、載有阿黴素的脂質體顆粒，並對HSFCM進行雙雷射升級，建立了對脂質體納米藥物的粒徑、載藥量和表面配體含量進行多參數同時表征的新方法，將為靶向納米藥物的合成最佳化、質量控制及細胞攝入研究等提供先進的測量技術。