單鏈結合蛋白（SSB，single strand DNA-binding protein）：又稱DNA結合蛋白，是DNA複製所必須的。單鏈結合蛋白不屬於酶，大腸桿菌細胞中的單鏈結合蛋白由4個相同的亞基組成，相對分子質量為74000，結合單鏈DNA的跨度約32個核苷酸單位；DNA解旋後，DNA分子只要鹼基配對，就有結合成雙鏈的趨向。SSB結合於螺旋酶沿複製叉方向向前推進產生的單鏈區，防止新形成的單鏈DNA重新配對形成雙鏈DNA或被核酸酶降解的蛋白質。ssb作用時表現協同效應，保證SSB在下游區段的繼續結合。它不像聚合酶那樣沿著複製方向向前移動，而是不停的結合，脫離。
螺旋酶沿複製叉方向向前推進產生了一段單鏈區，但是這種單鏈DNA不會長久存在，會很快重新配對形成雙鏈DNA或被核酸酶降解。然而，在細胞內有大量單鏈DNA結合蛋白(single strand DNA binding protein SSBP)能很快地和單鏈DNA結合，防止其重新配對形成雙鏈DNA或被核酸酶降解。SSBP與螺旋酶不一樣，它不具備酶的活性，不和ATP結合。在大腸桿菌細胞中主要SSBP是177肽所組成的四聚體，可以和單鏈DNA上相瓴的32個核苷酸結合。一個SSBP四聚體結合於單鏈DNA上可以促進其他SSBP四聚體與其相鄰的單鏈DNA結合，這個過程稱為協同結合(cooperative binding)，SSBP結合到單鏈DNA上後，使其呈伸展狀態，沒有彎曲和結節，有利於單鏈DNA作為模板。SSBP可以重複使用，當新生的DNA鏈合成到某一位置時，該處的SSBP便會脫落，並被重複利用。
