《單核細胞白血病浸潤轉移的行為及機制研究（活體）》是依託上海交通大學，由張勇擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：單核細胞白血病浸潤轉移的行為及機制研究（活體）
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張勇
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
癌症轉移是腫瘤學研究的重要前沿。本項目以單核白血病細胞的浸潤轉移為關鍵科學問題，利用斑馬魚發育與疾病模式生物體的獨特優勢，在前期單核巨噬細胞遷移研究工作的基礎上，通過條件性的Cre/loxP過表達技術在斑馬魚造血系統進行白血病融合基因的轉基因，力圖建立綠色可示蹤的單核白血病轉基因斑馬魚模型。在此基礎上，結合雷射共聚焦顯微鏡成像技術，在活體內實時動態觀察單核白血病細胞轉移的四維生物學行為。進一步可闡明單核白血病細胞浸潤轉移的內在精確機制，並對相關機制進行臨床血液學病例的檢測，從而進行單核細胞白血病浸潤轉移的轉化型醫學研究, 具有開創性意義。
結題摘要
我們成功構建PSGH2 (AML1-EVI1:HSE:EGFP)和PSGH2 (MYCN:HSE:EGFP)重組質粒，和I-SceI大範圍核酸轉移酶一起共顯微注射到野生型AB品系斑馬魚單細胞胚胎中，成功建立基於熱休克的條件性轉基因技術過表達人源AML1-EVI1基因、鼠源MYCN基因的“綠色”可示蹤的轉基因斑馬魚模型2個。經過驗證、穩定傳代後，我們對兩個模型進行了包括外周血細胞塗片、qRT-PCR、流式細胞儀、全胚胎原位雜交、免疫組化、基因晶片等技術進行血細胞分型、造血轉錄因子表達、造血細胞周期分布、造血細胞種群改變和各相關信號通路的檢測，初步闡明其過表達在造血發育形成和發展中的作用，並進行相關通路的初步探討。 我們發現穩定轉染後的TG（AML1-EVI1:HSE:EGFP）斑馬魚與野生型成魚相比，F2代紅系造血受抑，粒系的調控因子mpo表達量明顯升高，表明紅系分布向粒系造血轉化，結合外周血出現大量類似原始的單個核細胞的堆積，這些細胞核染色質疏鬆，有些具有核仁，紅細胞顯著減少，與人類白血病患者外周血表型類似。提示AML1-EVI1融合基因在血液系統，具有抑制細胞分化、細胞增殖和自我更新能力的多功能蛋白，它既抑制AML1功能又具有EVI1致癌潛能。本課題中MYCN基因過表達，促進斑馬魚的早期造血和HSC的存活、增殖，導致大量早期細胞的堆積。隨後的成長階段，MYCN沒有相應降解，從而使NDRG1不能正常表達，血細胞在腎髓和外周臟器堆積，卻無法分化成熟，不具備正常的生理功能，最終導致病理性的造血，出現白血病樣表型。由此可見，NRDG-1具有促進細胞分化、其負性表達與腫瘤的發生、發展、轉移密切相關，並受MYCN的調控等功能特點；在腫瘤中的表達有助於區別癌細胞與正常細胞，使其可能成為癌的特異性標記物，或可作為早期轉移的遺傳標記物，使我們增強比組織形態學更加高級的分辨能力，有助於癌的早期診斷和治療。實踐證實，斑馬魚是血液病新興的優勢模型，有利於我們單基因調控後，進行可視性直觀檢測。
