用一種染色劑對塗片進行染色，簡便易行，適於進行微生物的形態觀察。在一般情況下，細菌菌體多帶負電荷，易於和帶正電荷的鹼性染料結合而被染色。因此，常用鹼性染料進行單染色，如美蘭、孔雀綠、鹼性復紅、結晶紫和中性紅等。若使用酸性染料，多用剛果紅、伊紅、藻紅和酸性品紅等。使用酸性染料時，必須降低染液的PH值，使其呈現強酸性（低於細菌菌體等電點），讓菌體帶正電荷，才易於被酸性染料染色。
基本介紹
- 中文名：單染色法
- 方法：常用鹼性染料進行單染色
- 含義：用一種染色劑對塗片進行染色
- 經過：塗片、固定、染色、水洗
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主要特徵
單染色一般要經過塗片、固定、染色、水洗和乾燥五個步驟。
染色結果依染料不同而不同：
石碳酸復紅染色液：著色快，時間短，菌體呈紅色。
美蘭染色液：著色慢，時間長，效果清晰，菌體呈蘭色。
草酸銨結晶染色液：染色迅速，著色深，菌體呈紫色。
基本原理
所謂單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。此法操作簡便，適用於菌體一般形態的觀察。
在中性、鹼性或弱酸性溶液中，細菌細胞通常帶負電荷，所以常用鹼性染料進行染色。鹼性染料並不是鹼，和其他染料一樣是一種鹽，電離時染料離子帶正電，易與帶負電荷的細菌結合而使細菌著色。例如，美藍（亞甲藍）實際上是氯化亞甲藍鹽（methylenebluechloride，縮寫為MBC），它可被電離成正、負離子：
MBC→methylene blue++chloride-
帶正電荷的染料離子可使細菌細胞染成藍色。常用的鹼性染料除美藍外，還有結晶紫（crystal violet）、鹼性復紅（basicfu-chsin）、番紅（又稱沙黃，safranine）等。
細菌體積小，較透明，如未經染色常不易識別，而經著色後，與背景形成鮮明的對比，使易於在顯微鏡下進行觀察。
器材
顯微鏡，酒精燈，載玻片，接種環，雙層瓶，擦鏡紙，生理鹽水；
呂氏鹼性美藍染色液，石炭酸復紅染色液；
金黃色葡萄球菌，枯草芽孢桿菌。
操作步驟
1．塗片取兩塊乾淨的載玻片，各滴一小滴生理鹽水於載玻片中央，用無菌操作（圖Ⅳ-1，具體操作參照實驗一），分別挑取金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌於二載玻片的水滴中（每一種菌制一片），調勻並塗成薄膜。注意滴生理鹽水時不宜過多，塗片必須均勻。
2．乾燥於室溫中自然乾燥。
3．固定塗片面向上，於火焰上通過2—3次，使細胞質凝固，以固定細菌的形態，並使其不易脫落。但不能在火焰上烤，否則細菌形態將毀壞。
4．染色放標本於水平位置，滴加染色液於塗片薄膜上，染色時間長短隨不同染色液而定。呂氏鹼性美藍染色液約染2—3分鐘，石炭酸復紅染色液約染1—2分鐘。
5．水洗染色時間到後，用自來水沖洗，直至衝下之水無色時為止。注意沖洗水流不宜過急，過大，水由玻片上端流下，避免直接沖在塗片處。沖洗後，將標本晾乾或用吹風機吹乾，待完全乾燥後才可置油鏡下觀察。
6．鏡檢
按實驗程式進行顯微鏡觀察。
染色液
呂氏(Loeffler)鹼性美藍染液
A液：美藍(methylene blue) 0．6g
95%酒精30ml
B液：KOH 0．01g
蒸餾水100ml
分別配製A液和B液，配好後混合即可。
齊氏(Ziehl)石炭酸復紅染色液
A液：鹼性復紅(basic fuchsin) 0．3g
95%酒精10ml
B液：石炭酸5．0g
蒸餾水95ml
將鹼性復紅在研缽中研磨後，逐漸加入95%酒精，繼續研磨使其溶解，配成A液。
將石炭酸溶解於水中，配成B液。
混合A液及B液即成。通常可將此混合液稀釋5—10倍使用，稀釋液易變質失效，一次不宜多配。
