《單克隆抗體用於靶向型腺病毒載體改造》是依託南京大學，由李爾廣擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：單克隆抗體用於靶向型腺病毒載體改造
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李爾廣
- 依託單位：南京大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
課題計畫製備雙靶向性腺病毒載體，並研究其在腫瘤治療中的套用。.病毒載體特別是腺病毒載體是目前基因治療最為常用的載體。課題針對載體缺乏組織選擇性這一事實，計畫製備雙靶向性腺病毒載體並研究其在腫瘤治療中的套用。腺病毒載體的靶向性從兩個方面進行設計。第一、將抗血管內皮特異αv整合素的單抗以融合蛋白（TEF-scFv）的形式植入病毒顆粒表面，取代病毒感染決定因子纖維蛋白；第二、病毒在內皮細胞中的特異複製將通過血管內皮細胞特異性啟動子TIE2控制的E1a基因表達來實現。由於αv整合素在腫瘤新生血管內皮細胞表達高，改進型病毒將具有單抗和特異性啟動子控制的雙靶向性。載體的靶向性將通過細胞生物學及地鼠腫瘤模型驗證。由於增殖型腺病毒載體介導的基因/抗癌活性物質可以在靶細胞持續表達，所以只要靶細胞存在，病毒介導的基因就會表達，直至靶細胞全部被殺滅。預期改造後的載體具有識別細胞外受體和細胞內代謝途徑的雙靶向性。
結題摘要
病毒載體特別是腺病毒載體是目前基因治療最為常用的載體，但是存在組織選擇性低，免疫原性強等缺點。另外，由於腺病毒是人類最常見的病原體之一，體內中和抗體普遍存在，影響腺病毒的套用。本課題在前期工作的基礎上，擬通過引入針對細胞表面抗原為靶點的肽段至病毒衣殼，增強腺病毒載體的選擇性。由於自然界長期進化的結果，病毒衣殼蛋白的摺疊以及組裝具有嚴格的幾何要求，因此在非自然地引入肽段的同時，保持病毒的穩定性是一個試驗過程，有一定探索性。 在課題執行階段，我們克隆了靶向於血管內皮特異αv 整合素的單抗抗體，將其以單鏈抗體的形式（scFv）嵌入到腺病毒顆粒表面，以期取代病毒感染的天然決定因子。另外，我們將細胞特異性啟動子TIE2克隆至病毒，以期製備組織特異性腺病毒載體。課題期間，我們成功地製備了這些病毒。在實驗過程中，我們遇到了一個極具挑戰性的問題：改造後的腺病毒穩定性明顯下降。在細胞實驗上，這些病毒展示了一定的組織選擇性，但是整體遞送效果與野生型病毒相比明顯偏低。實驗發現，這與病毒的穩定性密切相關。在後期試驗中，我們把精力集中在表達載體的最佳化而不是原計畫的動物驗證。我們希望引入用於肽段連線的短肽等，提高病毒穩定性。 在項目執行期間，我們還製備了一系列用於實驗室研究使用的腺病毒，並成功地用於缺血性心梗研究和抗腫瘤研究工作。這些工作發表在學科主要刊物上。引用本課題資助的SCI論文總共4篇，SCI總分數在15分以上。
