《喉黏膜固有層多能幹細胞的鑑定及促進聲帶損傷的研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由鄧志宏擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：喉黏膜固有層多能幹細胞的鑑定及促進聲帶損傷的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：鄧志宏
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
聲帶疤痕由於聲帶固有層缺失，導致聲門閉合不全，出現發音困難和誤吸等症狀，影響患者的生活質量。其治療已成為嗓音外科研究的熱點和難點。目前幹細胞治療聲帶疤痕取得一定進展，但仍存在取材及組織來源差異較大等問題。喉黏膜範圍廣泛，與聲帶組織來源一致、結構相近，聲帶外黏膜取材方便、不留疤痕、不影響發音。我們在前期工作中已證實喉黏膜固有層存在多能幹細胞。本申請課題將進一步對單克隆喉黏膜固有層幹細胞進行生物學特性分析，並在體外培養環境下，通過定向誘導分化和細胞共培養技術，觀察喉黏膜固有層多能幹細胞的定向分化能力。已有研究證明，單純幹細胞植入修復效果不佳，植入細胞需複合在支架材料。脫細胞真皮基質具有無細胞免疫性、降解速度可調控等特點，將其製備成可注射性微粒，通過生物旋轉反應器，構建含幹細胞的微粒，注射並修復聲帶固有層缺損組織，評價喉黏膜固有層幹細胞修復聲帶缺損的效果，為臨床治療聲帶疤痕提供新的思路和方法。
結題摘要
聲帶疤痕、聲帶萎縮一直是困擾嗓音外科醫生的難題。近年來幹細胞治療聲帶損傷雖取得了一定的進展，但取材及組織來源問題一直是研究的瓶頸。喉黏膜因其範圍廣，取材相對方便，其組織來源與聲帶組織結構最為接近，若將其用於喉部組織的缺損修復，將會為聲帶損傷的患者帶來新的希望。 本實驗成功地從喉部黏膜中分離培養出了間充質幹細胞，並進行了鑑定。結果表明hLM-MSC不僅具有形成不同形態克隆的能力，增殖能力較強而且具有多向誘導分化潛能，是喉部組織工程理想的種子細胞。在此實驗基礎上，我們進一步對會厭與聲帶兩個不同部位的喉黏膜間充質幹細胞進行了生物學特性的比較，發現其生物學特性沒有顯著的差異。在培養的喉黏膜幹細胞中加入炎症因子後通過MTT試驗我們發現hLM-MSC的生長增殖能力比對照組有著明顯的減慢，細胞凋亡明顯增加。通過對炎症誘導的hLM-MSC進行實時定量PCR測定我們發現炎症可以下調與膠原表達相關的基因。我們進一步分離培養得到犬喉黏膜間充質幹細胞，並將其用於犬聲帶急性損傷的修復實驗。發現喉黏膜間充質幹細胞植入受損的聲帶組織後，其充血水腫較對照組減輕，萎縮程度小，瘢痕形成少。組織切片示喉黏膜間充質幹細胞可通過調節細胞外基質成分的合成，改變微環境修復聲帶損傷。DiI螢光標記幹細胞，螢光顯微鏡下見植入的喉黏膜間充質幹細胞主要分布於聲帶固有層中，術後2 w、4 w及8 w均可觀察到植入的LM-MSCs在聲帶記憶體活，但隨著時間的推移，其存活數量逐漸減少。螢光顯微鏡下植入的喉黏膜間充質幹細胞在受損聲帶固有層內轉化為成纖維細胞及肌成纖維細胞，提示LM-MSCs可通過直接轉化為固有層自身細胞參與聲帶的損傷修復。 此外，我們製備了直徑約200-450μm的脫細胞真皮基質微粒(MADM)，將兔脂肪來源幹細胞(rASCs)與脫細胞真皮基質微粒複合培養後注入急性損傷的兔聲帶，觀察其對損傷聲帶的修復重建效果。研究發現 rASCs能粘附MADM表面生長，而且MADM能明顯促進細胞增殖，形成 rASCs-MADM 複合體，可行聲帶內注射。聲帶注入rASCs-MADM複合體，不僅對聲帶有填充增容作用，而且減少聲帶損傷後其固有層的膠原沉積，在一定程度上預防聲帶萎縮、瘢痕形成。 本課題發表論文12篇，其中國內源期刊論文9篇、SCI論文3 篇，培養碩士研究生3名。
