基本介紹
- 中文名：咖啡因分配螢光法
- 外文名：Caffeine distribution fluorescence method
- 套用：測定油脂中苯並(a)芘
- 苯並(a)芘：致癌物
- 優點1：簡便、快速
- 優點2：結果準確可靠
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咖啡因分配螢光法研究背景
苯並(a)芘(BaP)是一種強致癌物質。由於環境和食品加工過程的污染，食品中特別是煙燻的肉類、油脂和水產品常含有超過衛生標準的苯並(a)芘；動物性食品在加工過程中或加工工藝不合理時，燃料或脂肪受高溫而熱解產生苯並(a)芘，因而常需進行檢驗。食品中苯並(a)芘的分析常採用萃取分離淨化後再用各種色譜法測定；如國標法採用二甲基亞楓或二甲基醯胺與環己烷或石油醚作液一液分配，缺點是常有乳化現象，且分離慢。
近年來，有人用Gertz的咖啡因絡合萃取法分離食品(特別是油脂)中的多環芳烴，淨化後用分光光度法、高壓液相色譜和氣相色譜進行測定。在此基礎上用改進的方法——咖啡因分配螢光法，淨化後用薄層板層析，直接用螢光掃描定量測定油脂中苯並(a)芘。
咖啡因分配螢光法原理
樣品的石油醚提取液，先以甲酸洗去雜質，再以咖啡因的甲酸溶液萃取，苯並(a)芘以水溶性的咖啡鹼複合物分離出來，經薄層板層析與其他多環芳烴分離，紫外燈下定位後，進行螢光掃描定量。
咖啡因分配螢光法的優點
（1）簡便、快速，樣品經分配後，濃縮液用C18預處理柱處理，省去了膠層洗脫等步驟，節省時間，排除大量有毒試劑；
（2）結果準確可靠，回收率基本滿足要求（國標法回收率80.6%）；
（3）和國標法相比，本法試劑便宜、低毒、用量少，主要試劑是咖啡因-甲酸，改善了對環境的污染，減少了對操作人員的毒性影響。
咖啡因分配螢光法具體步驟
樣品的提取與最佳化
（1）萃取：稱25g食用油與60mL石油醚混合轉入分液漏斗中，用甲酸洗三次，每次20mL，振盪2min，棄甲酸。用15%咖啡因-甲酸溶液連續萃取三次，每次20mL，振盪3min。將三次收集的60mL萃取液轉入三角燒瓶中，加2%硫酸鈉水溶液120mL，加石油醚50mL，猛烈振盪4min，轉入250mL分液漏斗中分層。下層再轉入原三角燒瓶中，加石油醚50mL重提一次，合併兩次石油醚，以44%的甲酸洗2次，每次20mL，搖0.5min。
(2)濃縮定容：將石油醚通過裝有無水硫酸鈉的漏斗脫水，轉入濃縮儀中，減壓蒸至近乾，以環己烷定容1mL。
(3)淨化：將此濃縮液通過C18預處理柱，密閉、避光、冷藏。
薄層層析
(1)點樣：將薄層板置點樣架上，距底邊2cm處用鉛筆劃一橫線，並標出點樣位置，二點間距1cm以上，取40μL濃縮液和20μLBaP標準使用液分別置於薄層板上，斑點直徑最好在5mm以下(可藉助吹風機邊點邊吹)。
(2)展開：將點好的薄層板置於層析缸內，缸內預先加入展開劑，使底邊浸入溶液中(約0.5cm)，避光展開18-20cm，取出晾乾，在紫外燈下作定位標記。如分離不徹底，可重複展開，用薄層掃瞄器作定量測定。
標準曲線製作
用標準貯備液配成0.5、1、2、4、8μg/mL)的標準使用液，分別用5μL毛細管吸取點於薄板上，通過掃描，制出標準曲線。
最低檢出限
用1μL毛細管分別吸取0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00(μg/mL）的標準使用液，點於薄板上，經薄層掃描，得出苯並(a)芘的檢測靈敏度為0.1ng。
方法的精密度試驗
分別取7份豆油，苯並(a)芘加入量為0.2μg/kg，測定。
方法的準確度試驗
取香油6份每份25g，其中3份加入苯並(a)芘量為0.4μg/kg，另3份加入量為1μg/kg，測定。
利用CS-930雙波長薄層掃瞄器測定油脂苯並(a)芘，具有選擇性強，套用廣的優點，為測定油脂中苯並(a)芘提供了一個新的方法。
