吸收試驗(absorption test)抗原與抗體的結合是特異性的,因此具有抗體活性的血清加入相應抗原後,抗體的活性下降或消失,這種作用稱為吸收試驗,對一未知抗體可以用已知抗原進行吸收,吸收後抗體活性下降或消失,說明未知抗體中含有與已知抗原相對應的抗體。有時被檢血清中有多種抗體,可用已知抗原分別吸收及鑑定抗體的性質。放散試驗的原理是抗原與抗體的結合是可逆的,在物理條件改變時,抗體又會從抗原抗體複合物上分離下來,將抗體由抗原抗體複合物上分離下來的試驗稱為放散試驗。
基本介紹
- 中文名:吸收放散試驗
- 外文名:absorption test
- 學科:生物學
- 方法:冷吸收 等
方法,放散試驗,熱放散試驗,乙醚放散試驗,試驗方法,套用,
方法
冷吸收 一份鹽水洗滌的已知抗原的壓積紅細胞,加一份被檢血清,混勻後置 4℃ 冰櫃吸收1~2小時 (ABO、MN、P血型系統等)。
熱吸收 一份鹽水洗滌的已知抗原的壓積紅細胞,加一份被檢血清,混勻後置37℃水浴箱中吸收(Rh血型系統等)。
吸收試驗可用於區別真假凝集:真凝集經吸收後凝集減弱或呈陰性;假凝集經吸收後凝集不變。
放散試驗
放散液 用放散試驗技術將大量附著於紅細胞上的抗體放散到小量的生理鹽水中,這種含有抗體的溶液稱為放散液。放散液中的抗體具有特異性,可以與相應抗原結合,從而可以進一步確定抗體的特異性。
熱放散試驗
主要套用ABO 血型系統新生兒溶血病及從紅細胞上洗脫掉IgM及IgG抗體。此方法製備抗體最容易,但抗體回收較差,即如果抗體較弱,放散試驗可得到假陰性的結果。其優點是適用於一般化驗室,缺點是放散液中含有較多游離白蛋白。
熱放散試驗方法
將疑有抗體包被的紅細胞用生理鹽水洗滌3-4次,最後一次儘量壓積紅細胞和吸取紅細胞上層的生理鹽水。在壓積紅細胞中加等量生理鹽水(也可用AB血清或6%白蛋白),置56℃水浴箱中7~8分鐘,期間搖動數次。取出後立即高速離心。3000 轉/分2分鐘;取上清液(櫻紅色的上清液即為放散液),與已知紅細胞試驗。按不同試驗要求做試驗,將放散液作為抗體使用。
熱放散試驗注意事項
鑑定放散液應與原抗原抗體反應方法相同,如抗體較弱,可用酶處理紅細胞做試驗。放散液用生理鹽水製備不穩定,若要保存放散液,用AB血清進行放散,受檢血清與吸收用紅細胞比例要高一些,若抗體弱,可以充分與紅細胞結合;熱放散溫度要準確,如溫度降低,放散出的抗體又會重新與抗原結合;放散抗體時,應不斷搖動,促使抗體從抗原抗體複合物上分離下來。
乙醚放散試驗
主要套用於溫自身抗體(IgG)或同種抗體引起的直抗陽性,以及用於分離IgG抗體混合物。其最大優點是適用於檢查獲得性溶血性貧血,鑑定Rh抗體效果最好,不宜用於 ABO 抗體鑑定。
試驗方法
取經洗滌3次的受檢壓積紅細胞1份,加1份生理鹽水,2份乙醚,用木塞蓋緊,顛倒試管,用力振搖1~2分鐘,然後以3000轉/分離心5分鐘,離心後分成3層,上層是乙醚,中層是紅細胞基質,下層是具有抗體的放散液(為櫻紅色或深紅色) 用吸管插入試管底部吸出放散液,若有渾濁可重新離心1次,將放散液置37℃水浴10分鐘,除盡乙醚,然後與一組譜紅細胞做間接抗球蛋白試驗,以鑑定抗體特異性。
酸放散
套用
可用於鑑定新生兒溶血病患兒紅細胞上的抗體;在溶血性貧血和可疑輸血反應中,用來鑑定產生直抗陽性的紅細胞;製備少量的單特異性抗體;從病人紅細胞上去除抗體;製備可用於自身吸收或鑑定血型及交叉配血次測試驗中使用的紅細胞。