口服福氏宋內茵痢疾雙價活疫苗用表達福氏2a和宋內志賀菌雙價菌體抗原的FS菌株，經培養收集菌體。
拼音名：Koufu Fushi Songneijun Liji Shuangjia Huoyimiao
英文名：Dysentery Vaccine(LiVe)0f S．flexneri and S．sonnei，Oral
書頁號：2005年版三部-31
本品系
後，加入穩定劑凍乾製成。用於預防細菌性痢疾。
1 基本要求
生產和檢定用設施、水、原料及輔料、器具、動物等應符合“凡例”的有關要
求。
2 製造
2.1 菌種
生產用菌種應符合“生物製品生產檢定用菌毒種管理規程”的有關規定。
2.1.1 菌種名稱及來源
生產用菌種系用生物工程技術構建的、能表達福氏2a和宋內志賀菌菌體抗原
的FS菌株。
2.1.2 種子批的建立
應符合“生物製品生產檢定用菌毒種管理規程”的有關規定。
2.1.3 種子批的傳代
菌種自開啟後傳代應不超過5代。
2.1.4 種子批菌種的檢定
2.1.4.1 培養特性及染色鏡檢
FS株在同體瓊脂上培養後生長呈無色半透明光滑的菌落，塗片染色鏡檢應
為革蘭陰性桿菌。
2.1.4.2 生化反應
發酵葡萄糖、甘露醇，遲緩發酵半乳糖，但不產氣；不發酵乳糖、麥芽糖、
蔗糖；無動力(附錄ⅪV)。
2.1.4.3 血清學試驗
(1) 玻片凝集試驗
取35～37℃培養18～20小時的培養物，與相應的福氏志賀菌群3.4，Ⅱ型參考血
清和宋內志賀菌I相參考血清，分別進行玻片凝集試驗，均應在1分鐘內出現凝集
反應。
(2)定量凝集試驗
取35～37℃培養18～20小時的培養物，以滅菌PBS(pH7.2～7.4)稀釋成
1.0×10〈9〉/ml，分別與福氏志賀菌群3、4，Ⅱ型參考血清和宋內志賀菌I相參考血
清做定量凝集試驗，充分混合後置35～37℃過夜，肉眼可見凝集之血清最高稀釋
度為凝集反應效價，凝集效價應不低於參考血清原效價之半。
2.1.4.4 豚鼠角結膜毒力試驗
選用體重300～350g豚鼠(Hartely)2隻，取35～37℃培養18～20小時的菌苔一接種
環(直徑3mm，約含5×10〈10〉個活菌)塗布於豚鼠角結膜，連續觀察7日，不得出現
任何炎症反應。
2.1.4.5 免疫力試驗
選用體重14～16g小鼠40隻，分為4組，每組10隻，其中兩組為免疫組，每隻皮
下注射總菌2.5×10〈9〉，另兩組為生理氯化鈉溶液對照組。共注射3次，每次間
隔3天。於末次注射後第14天，用福氏2a和宋內志賀菌菌株50LD〈[50]〉，分別
攻擊免疫組和對照組各一組，觀察3天，保護率應大於70%。
2.1.4.6 免疫原件試驗
將FS株接種於厚金格爾(簡稱厚氏)斜而或其他適宜培養基，35～37℃培養
18～20小時，刮取菌苔於滅菌的PBS(pH7.2～7.4)中，稀釋至一定濃度，經耳靜脈免
疫體重2kg左右的家兔3隻，每次0.5ml，免疫4次，間隔5～7天，4次注射的劑量分
別含菌2.5×10〈8〉、5.0×10〈8〉、1.0×10〈9〉、2.0X10〈9〉，於末次注射後10～14天
採血做定量凝集試驗，測血清抗體效價。免疫血清對福氏2a型忠賀菌的凝集效價
不低於1:1280，對宋內志賀菌效價應不低於l：320，2/3家兔血清之凝集效價達到上
述要求即為合格。
2.1.4.7 質粒DNA檢測
用Kado-Liu法提取FS培養物的質粒DNA，經0.8%瓊脂糖凝膠電泳法檢測應呈該
菌株典型的質粒圖譜。應有分子質量為49MI)(百萬道爾頓)和74MI)的兩條人質粒帶
及另兩條小質粒帶。
2.1.5 菌種保存
菌種應凍乾保存於2～8℃。
2.2 原液
2.2.1 生產用種子
工作種子批菌種檢定合格後可使用2年，但每次生產前必須檢查全部特性，
合格後方可使用。
啟開凍乾工作種子批菌種，用火菌PBS(pH7.2～7.4)或厚氏肉水復甦後鋪種厚氏
斜面或接種厚氏液體培養基，置35～37℃培養18～20小時；第2～3代菌種採用厚氏
液體培養基，35～37℃培養6～8小時。由此製備生產用種子。
2.2.2 生產用培養基
採用厚氏液體培養基或其他適宜培養基。
2.2.3 菌種接種和培養
將純菌檢查合格後的種子液接種於培養罐內，初始濃度達4×10〈8〉/ml以上
為宜，35～37℃堵養8～11小時。培養過程中應取樣鏡檢，發現污染即廢棄。
2.2.4 收穫
在細菌對數生長期末時收穫菌體，離心後將菌體混懸於已滅菌的穩定劑中。
2.2.5 原液檢定
按3.1 項進行。
2.3 半成品
2.3.1 配製
將混懸於穩定劑中的濃菌液，用含5%蔗糖、0.5%明膠的磷酸緩衝液稀釋至
1.0×10〈11〉/ml。可用單批原液或多批原液混合配製。
2.3.2 半成品檢定
按3.2項進行。
2.4 成品
2.4.1 分批
應符合“生物製品分批規程”規定。
2.4.2 分裝及凍乾
應符合“生物製品分裝和凍乾規程”規定。分裝後立即凍下，凍乾過程中製品
溫度不超過30℃。乾燥完畢後立即進行真空或充氮封口。
2.4.3 規格
每瓶lml。含菌1.0×10〈11〉，其中活菌數應不低於2.0×10〈10〉。
2.4.4 包裝
應符合“生物製品包裝規程”規定。
