受體載體轉移法將含有目的基因的重組質粒和某些細胞表面受體能識別的特異性多肽。這種方法可使外源基因在活體內導向特異類型的細胞,如可將目的基因和去唾液酸糖蛋白偶聯起來,使肝細胞能特異性地吸入,並在肝細胞中表達。
基本介紹
- 中文名:受體載體轉移法
- 釋義:將含有目的基因的重組質粒和某些細胞表面受體能識別的特異性多肽形成複合物
受體載體轉移法將含有目的基因的重組質粒和某些細胞表面受體能識別的特異性多肽。這種方法可使外源基因在活體內導向特異類型的細胞,如可將目的基因和去唾液酸糖蛋白偶聯起來,使肝細胞能特異性地吸入,並在肝細胞中表達。
受體載體轉移法將含有目的基因的重組質粒和某些細胞表面受體能識別的特異性多肽。這種方法可使外源基因在活體內導向特異類型的細胞,如可將目的基因和去唾液酸糖蛋白偶聯起來,使肝細胞能特異性地吸入,並在肝細胞中表達。由於通過受體識...
運載體(Vector),一是用它作為運載工具,將目的基因轉移到受體細胞中去;二是利用它在受體細胞內對目的基因進行大量的複製(稱為克隆)。最終在受體細胞中表達大量目的基因產物,經分離純化被人們利用。作用 在基因操作過程中使用運載體有兩個目的:一是用它作為運載工具,將目的基因轉移到宿主細胞中去;二是利用它...
顯然,這種技術轉移模式對技術受體原有技術水平的依賴性較強,要求匹配的條件較為苛刻。雖然技術轉移的支付成本較低,但嫁接環節上發生風險的頻率較大。一般為技術實力較為均衡的國家、地區、企業之間所採用。2、從技術載體的差異性上,可以將技術轉移區分為“實物型”、“智慧型型”和“人力型”技術轉移3種模式 所謂...
基因轉移是用物理的、化學的或生物學的方法將目的基因導入受體細胞並使之表達的一種技術。物理方法 包括顯微鏡注射法、電脈衝介導法。顯微注射法是套用特別的玻璃顯微注射器在顯微鏡下把重組DNA導入靶細胞;電脈衝介導法又稱電穿孔法,是指在高壓電脈衝的作用下,使細胞膜上出現瞬間微小的孔洞,從而介導不同細胞之間的...
名稱: 基因轉移法 主題詞或關鍵字: 基因 生命科學 載體轉移基因的做法,一是將含有外源基因的根瘤農桿菌與受體原生質體共同培養;二是將含有外源基因的質粒和受體原生質體用聚乙二醇處理轉化,最後由轉化體育成轉化植物。在植物中,利用載體轉移外源基因的技術主要套用於雙子葉植物,如番茄、甜菜、棉花、大豆等。微注射...
基因轉移技術是將外源目的基因或DNA片段引入受體生物或細胞並使其表達的一種技術。基因轉移可分為物理學、化學和生物學三類方法。它是重組DNA技術和基因治療的關鍵步驟之一。外源基因與載體在體外重組形成重組DNA分子後,為了分析基因的表達,測定表達對細胞生長的影響,研究該基因的結構與功能,得到高表達的基因產物。基...
植物細胞等。其中,對於細菌或植物細胞,常用質粒作為載體將目的基因導入細胞內;動物細胞則用顯微注射的方法將目的基因導入動物受精卵的雄性原核中。過程 用人工方法使體外重組的DNA分子轉移到受體細胞,主要是借鑑細菌或病毒侵染細胞的途徑。例如,如果運載體是質粒,受體細胞是細菌,一般是將細菌用氯化鈣處理,以增大...
受體與配體相互作用具有高特異性、高選擇性、高親和性、飽和性和可逆性等特點,用放射性核素標記配體,將放射性配體注入機體後,可導向到達含有高密度受體的靶器官或靶組織,發揮射線的輻射生物效應,達到治療的目的。同時,受體配體具有載體作用,受體的配體能載上藥物,形成藕聯物,藕聯物進入機體後,可大大提高治療...
2、克隆載體一般能在攜帶外源DNA片段進入受體細胞後,或停留在細胞質中進行自我複製;或整合到染色體DNA、線粒體DNA或葉綠體DNA中,隨著這些DNA的複製而同步複製;或自成染色體而和其他染色體一樣自我複製。如果要求克隆載體中的外源基因在受體細胞中能有效表達,克隆載體必須含有使外源基因得以表達的各種元件,構建成基因...
(3)脂質體染法 :脂質體能在體內或體外提供運載外源性遺傳物質進入細胞的載體。脂質體介導的基因轉移的最大優勢在於能在活體內套用。2、生物方法 (1)直接注射法 :將含有DNA的溶液直接注射到肌肉,以引起鄰近的細胞攝入DNA鏈進行表達,在肌細胞中,基因表達可持續數月。(2)受體介導的基因轉移 :依靠受體介導...
以噬菌體為媒介,把供細菌的基因轉移到受體菌內,導致後者基因改變的過程稱為轉導。當噬菌體在細菌中增殖並裂解細菌時,某些DNA噬菌體(稱為普遍性轉導噬菌體)可在罕見的情況下(約105~107次包裝中發生一次),將細菌的DNA誤作為噬菌體本身的DNA包入頭部蛋白衣殼內。當裂解細菌後,釋放出來的噬菌體通過感染易感...
方法是將HeLa TK-細胞用73Col-CAT報告基因連同受體的表達載體轉染,與受試物一起培養,用ELISA方法檢測CAT活性。1.5.5.4 G2檢查點(G2 checkpoint) Roberge等建立了G2期檢查點抑制劑的高通量篩選方法。將MCF-7m p53細胞培養,種在96孔聚苯乙烯組織培養板上。照射使細胞進入G2靜止期,加入受試化合物用ELISA...
轉基因動物表達系統,包括外源基因、表達載體和受體細胞等,基因組的轉移則是細胞核移植和動物克隆技術,人工合成與設計基因、全基因乃至基因組的轉基因技術是合成生物學。轉移方法 哺乳類動物基因轉移方法,是將改建後的目的基因(或基因組片段)用顯微注射等方法注入實驗動物的受精卵(或著床前的胚胎細胞),然後將此...
分子育種方法亦稱基因工程育種法,是在分子水平上將外來的(由其他生物中提取的)或人工合成的DNA(或RNA)分子片斷,用人工的方法進行重組,然後通過一定的載體引入到“受體”生物的細胞內,同原有的DNA組合,使後代“表達”出新引入的DNA(或RNA)攜帶的遺傳信息所控制的遺傳性狀,從而快速、穩定而定向地創造出新品種(或...
基因克隆法是用重組DNA技術將外源DNA片段與基因載體相結合,然後轉移到適當的受體細胞中,隨著細胞的增殖而形成這一片段的無性繁殖系,即克隆。如果外源DNA片段是某種生物基因組的DNA隨機片段,那么所形成的眾多克隆總稱為該生物的基因文庫。基因文庫的建立為進一步分離基因打下基礎。從1974年起相繼建立了大腸桿菌、酵母...
3.改造T細胞:用基因工程技術,把一個含有能識別腫瘤細胞且激活T細胞的嵌合抗原受體的病毒載體轉入T細胞,即把T細胞改造成CAR-T細胞。4.擴增CAR-T細胞:在體外培養以大量擴增CAR-T細胞。一般一個病人需要幾千萬,乃至幾億個CAR-T細胞,體重越大,需要細胞越多。5.CAR-T細胞回輸入人體:把擴增好的CAR-T細胞通過靜脈回...
將這些載體導入到受體細菌或細胞中,這樣每個細胞就包含了一個基因組DNA片段與載體重組DNA分子,經過繁殖擴增,許多細胞一起包含了該生物全部基因組序列,我們將這一個集合體叫做基因文庫。用重組DNA技術將某種生物細胞的總DNA 或染色體DNA的所有片斷隨機地連線到基因載體上,然後轉移到適當的宿主細胞中,通過細胞增殖而...
2、根據質粒基因型和受體菌基因型互補原則而定;重組子的篩選方法常用的有兩種方法:1、抗生素篩選法:菌株為某種抗生缺陷型,而質粒上帶有該抗性基因(如氨苄青黴素,卡拉黴素等)這樣只有轉化子才能在含該抗生素的培養基上長出。本實驗利用抗生篩選轉化子。2、互補法:至今使用的許多載體(如PUC系列)有含有一個大腸...
表面活性劑可以作為一種滲透劑,使細胞膜變得敏感,也可以通過減小表面張力,促進農桿菌與受體細胞的親和,提高轉化效率。1998年Clough等通過表面活性劑Silwet-77,提高了轉化效率。核機制附著序列(matrix attachment regions,MAR)與T-DNA在植物細胞內穩定、轉運和整合有關,因此可以通過在表達載體上插入這樣一段序列來...
Feldmann ( 1987 )首次報導成功運用這種方法將外源 DNA 片段轉移到受體基因組中並可穩在 T2 和 T3 代穩定遺傳。具體做法是將外源基因片段與卸甲載體整合在一起 , 擬南芥種子萌發期間,將農桿菌菌液與擬南芥種子浸泡在一起。 Chang ( 1990 )發展了另一種 in planta 轉化方法,擬南芥花期,將擬南芥花序從根部剪...
(4)在F+×F-中,結果使F-變為F+,很少發生基因重組(供體與受體之間)因為F+大部分是游離的,不轉移,只有個別的細胞是整合狀態。只有整合的才能轉移,進行基因重組。(5)在Hfr×F-中,F-很少變成F+,基因重組頻率比較高。雜交後,育性基因沒有轉移。中斷雜交法定位大腸桿菌的基因 在Hfr×F-過程中,人為...
Hasegawa等採用日本血凝病毒( hemagglutinating virus of Japan,HVJ)脂質體為載體,用HSV-tk/Gcv系統治療肝癌發現,在體外試驗中當Gcv的濃度100microg/ml時幾乎所有腫瘤均被殺死,甚至當轉導率只有20%時,也有1/3腫瘤被消滅。此方法重複套用效果更佳,且皮下注射未見明顯的炎症反應。2.2受體介導法 利用肝細胞上...
不相連的兩個或多個外源基因同時轉移入一個細胞。套用學科:生物化學與分子生物學(一級學科);方法與技術(二級學科)定義2:不相連的兩個或多個外源基因同時轉移入一個細胞的過程。套用學科:細胞生物學(一級學科);細胞培養與細胞工程(二級學科)定義3:兩個或多個DNA分子同時轉化受體細胞。套用學科:遺傳學...
質粒載體 把一個有用的目的DNA片段通過重組DNA技術,送進受體細胞中去進行繁殖和表達的工具叫載體(Vector)。細菌質粒是重組DNA 技術中常用的載體。質粒分子本身是含有複製功能的遺傳結構。質粒還帶有某些遺傳信息,所以會賦予宿主細胞一些遺傳性狀。其自我複製能力及所攜帶的遺傳信息在重組DNA操作,如擴增、篩選過程中都...
②、過程:CaCl2處理細胞 → 感受態細胞 → 表達載體與感受態細胞混合 → 感受態細胞吸收DNA分子。⑵、植物細胞:農桿菌轉化法、基因槍法、花粉管通道法 ①、農桿菌:土壤微生物,易感染雙子葉植物和裸子植物;對大多數單子葉植物沒有感染力。②、Ti質粒的T_DNA可轉移到受體細胞,並整合到受體細胞染色體DNA上。③...
由於每一重組體只攜帶某一段外源基因,而轉化或轉染時每一受體菌又只能接受一個重組體分子,如何將眾多的轉化菌落或轉染噬菌斑區分開來,並鑑定哪一菌落或噬菌斑所含重組DNA分子確實帶有目的基因,這一過程即為篩選或選擇。根據載體體系、宿主細胞特性及外源基因在受體細胞表達情況不同,可採取直接選擇法或非直接選擇法...
病毒載體 病毒作為一種生物經過億萬年的進化,對人的細胞具有自然的感染力。以人工改造的病毒DNA作為基因進入細胞的運輸工具稱為病毒載體,它能與細胞的表面受體相互識別繼而把外源基因轉入靶細胞內。病毒具有一些獨特的性質如多數病毒可感染特異的細胞,在細胞內不易降解等,因此病毒載體是良好的基因轉運體。目前已被用...
5.1.4外源基因通過噬菌體轉導進入受體細胞/ 131 5.2把目的基因導入酵母細胞/ 133 5.2.1聚乙二醇介導的酵母轉化/ 133 5.2.2金屬陽離子介導的酵母轉化/ 134 5.3把目的基因導入植物細胞/ 134 5.3.1DNA直接轉移法/ 135 5.3.2農桿菌Ti質粒載體介導法/ 137 5.4把目的基因導入動物細胞/ 141 5.4.1外源...
用人工方法使體外重組的DNA分子轉移到受體細胞,主要是借鑑細菌或病毒侵染細胞的途徑。例如,如果運載體是質粒,受體細胞是細菌,一般是將細菌用氯化鈣處理,以增大細菌細胞壁的通透性,使含有目的基因的重組質粒進入受體細胞。目的基因導入受體細胞後,就可以隨著受體細胞的繁殖而複製,由於細菌的繁殖速度非常快,在很短的...