反向打點雜交技術 項具體操作技術。 reverse dot 61ot系指分子遺傳學}i 它由(',nnner等人於1夕83年首創的等位基因特異性寡核。
內容簡介
反向打點雜交技術 項具體操作技術。 reverse dot 61ot系指分子遺傳學}i 它由(',nnner等人於1夕83年首創的等位 基因特異性寡核昔酸[ AS())探針雜交技術上發展起來，由聚 合酶鏈式反應LPLH)技術創立者之一Saiki等人改進並建立 了這一反向打點雜交技術。傳統的A.SCI探針雜交技術是將 靶DNA(基因組DNA或PCR擴增片段)點在膜上，使其與液 相中的探針退火，經洗膜後檢出信號:而改進後的技術是將 .}ao探引固定在尼龍膜上，用擴增的nvn樣品與膜址探針 雜交。由於A5U探針長度有限(一般為l5一?}個鹼基)，為 使寧柔針序列不受周定過程的影響，、與A5U合成後，用末端轉移酶在其3，一端加一f=段多聚核營}[dT)尾(一般為4ix)個 左右〕，這種帶尾的A5C3點在膜上後.經紫外光照射。其多聚 dT即可與尼龍膜表面l}氨基發生作用1自丁結合在膜條I幾。這 一個“反向”體系的突出特點之一是能將多種不同序列的 A5C1均固定在同一條膜i -.。關鍵是,4Sf}的設計需根據其鹼 從組成選擇探乍1-長度，以使各種固定的nao在雜交時具有盡 可能接近的解鏈溫度}T} )這樣一張膜經一次雜交即可鑑 定出樣品中多種不同的突變。其缺點是對!幾術知IOTA序列 及其突變類型的檢測對象無能為力。本方法主要是作為基囚 診斷X17遺傳病、1)N}'1多態性及癌琴因分析等領域y
