《原鈣黏蛋白β5介導C型肝炎病毒入胞的作用及機制研究》是依託浙江大學，由朱海紅擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：原鈣黏蛋白β5介導C型肝炎病毒入胞的作用及機制研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：朱海紅
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
全球HCV感染者約為1.7億，目前尚無預防用疫苗,因此HCV感染是日益嚴重的公共衛生問題。HCV入胞相關宿主因子是潛在藥物靶點。近年來隨著HCV體外細胞培養體系的突破性進展，多個參與HCV入胞的宿主因子的發現使HCV入胞過程逐漸清晰，但尚未完全明了。本課題前期工作發現細胞黏附分子- - 原鈣黏蛋白β5（PCDHB5）可介導HCV的入胞過程。本申請擬構建不同截短長度PCDHB5表達質粒，研究PCDHB5與HCV E2的結合功能域；分別共轉染PCDHB5和已知HCV入胞相關分子CD81/SR-B1/CLDN1/OCLN的表達質粒，用免疫共沉澱研究PCDHB5與這些相關分子的相互作用；製備抗PCDHB5單克隆抗體，篩選具有抑制不同基因型HCV入胞功能的高親和力的中和抗體。深入研究PCDHB5介導HCV入胞作用及機制，以進一步解析HCV生活周期，為全面闡明HCV致病機制和研製新的防治策略提供理論依據。
結題摘要
C型肝炎病毒(HCV)是引起病毒性肝炎的主要病原體之一，全球約有1.7億感染者。約80%感染者將發展為慢性C型肝炎，並最終進展為肝硬化和肝細胞癌，且C型肝炎尚無疫苗可供預防，因此已成為全球性的公共衛生問題。 HCV入胞相關的宿主因子可以作為防治HCV感染的藥物靶點。近年來隨著HCV體外細胞培養體系的突破性進展，越來越多的研究表明HCV入胞是一個緩慢而又複雜的多級過程。 本課題組發現不同基因型的HCV pseudoparticles (HCVpp) 可以感染非肝細胞來源的神經母細胞瘤細胞系SKNMC。用基因晶片分析了HCV受納細胞和HCV非受納細胞的基因表達情況，篩選到23個表達差異的細胞膜蛋白，包括原鈣黏蛋白β5（PCDHB5）和CLDN1等分子。在一系列HCV非受納細胞過表達PCDHB5可以使這些細胞系感染HCV；siRNA干擾技術沉默PCDHB5基因表達後HCV感染率下降；抗PCDHB5多克隆抗體具有拮抗HCV感染的效應；免疫共沉澱實驗證實PCDHB5可特異性結合HCV E2區域。 本課題進一步利用體外表達的PCDHB5和HCV包膜蛋白研究了PCDHB5與HCV包膜蛋白的結合作用，以及HCVcc培養系統感染HCV後行co-IP，多角度證實了PCDHB5可結合HCV E2。 PCDHB5分子有5個胞外功能域（N端）和1個胞內區（C端），C-tail有可變區域和保守區域，我們構建了不同截短的PCDHB5表達質粒：（1）不同C端截短；（2）不同N端截短；（3）不同C-tail截短；（4）糖基化位點的5個突變體。結果顯示，C端缺失和N端缺失的PCDHB5喪失了介導HCV入胞的能力；C-tail保守區域缺失的PCDHB5喪失了功能，而可變區域缺失則無明顯影響；糖基化位點突變對PCDHB5功能無明顯影響。 我們研究了PCDHB5和CD81、SR-B1和CLDN1等分子的相互作用。結果顯示，PCDHB5可結合CLDN1，而不依賴CD81和SR-B1。 本課題用編碼PCDHB5全序列的真核表達質粒作為免疫原，製備了PCDHB5的單克隆抗體，獲得了5株單克隆抗體。HCVcc細胞模型篩選到其中一株單克隆抗體具有抑制HCV感染細胞的作用。 以上研究成果對深入研究PCDHB5介導HCV入胞作用及機制，進一步解析HCV生活周期以及為全面闡明HCV致病機制和研製新的防治策略具有重要意義。
