基本介紹
- 中文名：半胱氨酸數
- 外文名：Cysteine number
概述,原理,計算方法,質譜鑑定條件,
概述
自然界中，大多數蛋白質都含有半胱氨酸殘基，半胱氨酸殘基之間可以形成二硫鍵，而二硫鍵對蛋白質的三級和四級結構的穩定性是非常重要的。二硫鍵可以使蛋白質免受損壞，並且可以增加蛋白質的半衰期，因此二硫鍵可以維持蛋白的穩定性。
原理
4-乙烯吡啶可以結合半胱氨酸，從而阻止半胱氨酸形成二硫鍵，因此，一個4-乙烯吡啶可以和一個半胱氨酸結合。在提取蛋白質樣品時，一組樣品加入4-乙烯吡啶，另一組樣品不加4-乙烯吡啶，然後進行質譜鑑定。增加的分子量和該蛋白質所含有的半胱氨酸數目相關，即高分子量蛋白每含有一個半胱氨酸殘基，其分子量會相應增加大約105.14Da（即一個4-乙烯吡啶的分子量）。
計算方法
首先通過質譜獲得同一種蛋白在兩種處理（用4-乙烯吡啶處理和未用4-乙烯吡啶處理）下的分子量分別是多少，然後用4-乙烯吡啶處理過的分子量減去未用4-乙烯吡啶處理的分子量，最後再除以105，得到的結果就是該待測蛋白中所含有的半胱氨酸殘基的數目。
質譜鑑定條件
採用AppliedBiosystems公司生產的質譜儀器4800，質譜參數為雷射強度2500，質量範圍65-95kDa，加速電壓25kV，板極電壓92%，尺度0.3%，延遲時間1000ns。對獲得的蛋白質質量譜利用軟體進行數據處理分析。
