升壓物質檢查法,系比較垂體後葉標準品(S)與供試品(T)升高大鼠血壓的程度,以判定供試品中所含升壓物質的限度是否符合規定。
標準品,稀釋液,供試品,檢查法,
標準品
照縮宮素生物檢定法標準品溶液的配製法,按垂體後葉標準品升壓素單位計算,配成每1ml中含1單位的溶液,分裝於適宜的容器內,4~8℃貯存,如無沉澱析出,可在3個月內使用。
稀釋液
臨用前,精密吸取標準品溶液適量,用氯化鈉注射液配成每1ml中含0.1單位的稀釋液。
供試品
按正文規定的限量,配成適當濃度的供試品溶液;試驗時,供試品溶液與標準品稀釋液的注入體積應相等。
檢查法
取健康無傷、體重300g以上的成年雄性大鼠,用適宜的麻醉劑(如腹腔注射烏拉坦1g/kg)麻醉後,固定於保溫手術台上,分離氣管,必要時插入插管,以使呼吸通暢。在一側頸靜脈或股靜脈插入靜脈插管,供注射藥液用,按體重每100g注入肝素溶液50~100單位,然後剝離另一側頸動脈,插入與測壓計相連的動脈插管,在插管與測壓計通路中充滿含適量肝素鈉的氯化鈉注射液。全部手術完畢後,將測壓計的讀數調節到與動物血壓相當的高度,開啟動脈夾,記錄血壓。緩緩注入適宜的交感神經阻斷藥(如甲磺酸酚妥拉明,按大鼠每100g體重注入0.1mg,隔5~10分鐘用相同劑量再注射一次),待血壓穩定後,即可進行藥液注射。各次注射速度應基本相同,並於注射後立即注入氯化鈉注射液0.5ml,相鄰兩次注射的間隔時間應基本相同(一般約為5~10分鐘),每次注射應在前一次反應恢復穩定以後進行。
選定高低兩劑量的垂體後葉標準品稀釋液(ml),高低劑量之比約為1∶0.6,低劑量應能使大鼠血壓升高1.33~3.55kPa,將高低劑量輪流重複注入2~3次,如高劑量所致反應的平均值大於低劑量所致反應的平均值,可認為該動物的靈敏度符合規定。
在上述高低劑量範圍內選定標準品稀釋液的劑量(ds),供試品溶液按正文中規定的劑量(dT),照下列次序注射一組4個劑量:ds、dT、dT、dS,然後以第一與第叄、第二與第四劑量所致的反應分別比較;如dT所致的反應值均不大於ds所致反應值的一半,即認為供試品的升壓物質檢查符合規定。否則應按上述次序繼續注射一組4個劑量,並按相同方法分別比較兩組內各對ds、dT所致的反應值;如dT所致的反應值均不大於ds所致的反應值,仍認為供試品的升壓物質檢查符合規定,如dT所致的反應值均大於ds所致的反應值,即認為供試品的升壓物質檢查不符合規定;否則應另取動物複試。如複試的結果仍有dT所致的反應值大於ds所致的反應值,即認為供試品的升壓物質檢查不符合規定.