基本介紹
- 中文名：化妝品中32種禁限用染料成分的檢測方法
- 發布單位：國家食品藥品監督管理局
- 發布時間：2012年1月18日
- 字號：國食藥監保化[2012]13號發布
拼音,適用範圍,方法提要,試劑和材料,儀器,測定步驟,平行實驗,
拼音
huàzhuāngpǐnzhōng32zhǒngjìnxiànyòngrǎnliàochéngfēndejiǎncèfāngfǎ
《化妝品中32種禁限用染料成分的檢測方法》由國家食品藥品監督管理局於2012年1月18日國食藥監保化[2012]13號發布。
適用範圍
本方法規定了測定染髮類化妝品中32種禁限用染料成分（見附錄A）的高效液相色譜法。
本方法適用於染髮類化妝品中32種禁限用染料成分的含量測定。化妝品中的染料成分以多種形式存在，如硫酸鹽、鹽酸鹽等，當各種形式同時存在時，應以其中的一種形式表示。
方法提要
用無水乙醇+水=1+1的混合溶液提取染髮類化妝品中的32中禁限用染料成分，用高效液相色譜儀進行分析，以保留時間和紫外吸收光譜定性，峰面積定量。
試劑和材料
除另有規定外，所用試劑均為分析純，水為一級實驗用水。
3.1無水乙醇。
3.2甲醇，色譜純。
3.3乙腈，色譜純。
3.4亞硫酸氫鈉。
3.5磷酸溶液（1+9）：吸取磷酸（ρ20=1.69g/mL）10mL，加水90mL。
3.6磷酸鹽混合溶液：稱取十二水合磷酸氫二鈉1.8g、磷酸二氫鉀2.8g和庚烷磺酸鈉（C7H15SO3Na）1.0g，用水稀釋至1L，混勻，配製成含庚烷磺酸鈉（1g/L）的磷酸鹽緩衝液，加入磷酸溶液（3.5），調節pH至6，0.45μm微孔濾膜過濾。
3.7染料類化合物標準儲備溶液（ρ（染料成分）=10g/L）：稱取染料對照品約100mg（精確至0.1mg）於10mL容量瓶中，以2g/L亞硫酸氫鈉水溶液+無水乙醇（3.1）=1+1的混合溶液定容至10mL，配成約10g/L的單標溶液。以下幾種物質在上述溶劑中的溶解性較差，分別採取如下措施：甲苯-2,5-二胺硫酸鹽和2-氯-p-苯二胺硫酸鹽2種物質直接用2g/L亞硫酸氫鈉水溶液溶解並定容；甲苯-3,4-二胺直接用無水乙醇（3.1）定容；2-硝基-p-苯二胺和4-硝基-o-苯二胺需將稱樣量減至25mg，再用無水乙醇（3.1）定容，配成約2.5g/L的單標溶液。儲備液保存於0℃～4℃冰櫃中，最多使用2天。
儀器
4.1高效液相色譜儀，具有二極體陣列檢測器。
4.2分析天平，感量為0.0001g。
4.3分析天平，感量為0.001g。
4.4精密pH計，精度0.01。
4.5超音波清洗器。
4.6離心機。
4.7渦旋混合儀。
測定步驟
5.1樣品處理
稱取樣品約0.5g（精確至0.001g）於10mL具塞比色管中，加無水乙醇（3.1）+水=1+1的混合溶液至刻度，渦旋1min，冰浴超聲提取15min。渾濁溶液可取適量5000rpm離心5min，取上清液經0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為待測溶液，並儘快測定。
5.2測定
5.2.1色譜參考條件
色譜柱：RP-AMIDEC16柱（250mm×4.6mm，5μm）或等同柱；
色譜保護柱：RP-AMIDEC16保護柱（20mm×4.0mm，5μm）或等同柱；
流動相1：乙腈（3.3）+磷酸鹽混合溶液（3.6）=10+90；
流動相2：甲醇（3.2）+磷酸鹽混合溶液（3.6）=10+90；
流動相3：乙腈（3.3）+磷酸鹽混合溶液（3.6）=40+60；
流量：1.0mL/min；
檢測器：二極體陣列檢測器；
檢測波長：280nm；
柱溫：25℃。
5.2.2校準曲線的製備
參照色譜圖1~色譜圖3，對32種禁限用染料成分進行分組，並根據分組情況，分別移取適量染料類化合物標準儲備溶液（3.7）於10mL容量瓶中，用無水乙醇（3.1）稀釋至刻度，配成500mg/L的混合標準溶液。各取混合標準溶液適量，用無水乙醇（3.1）稀釋，配成10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L、250mg/L、500mg/L共6個濃度的混合標準系列。標準系列應於使用前配製。
取各標準系列5μL注入高效液相色譜儀，分別採用3種流動相進行分析，記錄各色譜峰面積，繪製校準曲線。32種禁限用染料成分在流動相1和流動相2中的保留時間參考附錄B。
5.2.3樣品測定
在設定色譜條件下，取待測溶液5μL注入高效液相色譜儀，分別採用3種流動相體系進行分析。色譜圖檢出的物質，經與該物質對照品的保留時間和紫外光譜圖比較確證後，根據峰面積，從校準曲線上查得相應組分的質量濃度。若待測溶液中染料成分的質量濃度超過了校準曲線線性範圍的上限，需對待測溶液進行適當稀釋。
註：實際操作過程中，可參考附錄B中32種禁限用染料成分在流動相1和流動相2中的保留時間，並結合色譜分離情況和樣品中染料成分的不同，對32種染料成分進行合理分組，使各染料成分獲得完全分離。若染料成分間不能達到基線分離，可對色譜條件進行適當調整，如降低流速或降低有機相比例等。
平行實驗
按以上步驟，做兩份樣品的平行測定。在重複性條件下獲得的兩次獨立測試結果的絕對差值不大於這兩次測定值的算術平均值的10%。
