《利用ZFN技術建立FOXO3敲除豬研究卵巢早衰的發生》是依託南京大學，由黃行許擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：利用ZFN技術建立FOXO3敲除豬研究卵巢早衰的發生
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：黃行許
- 依託單位：南京大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
基因工程小鼠是卵巢早衰研究的動物模型。不過由於器官大小、解剖結構、生理代謝等方面與人類的差異，也由於採血困難，血量不足等原因，小鼠模型不能滿足卵巢早衰研究需要。本課題擬選擇解剖結構、免疫系統、心血管系統以及代謝等方面與人體具有高度相似性，並且易於反覆採血的豬作模式動物，通過我們已經建立的結合基因合成和斑馬魚胚胎注射的ZFN篩選辦法，利用我們的豬基因組改造平台，通過豬胚胎顯微注射，建立FOXO3這一卵巢早衰密切相關轉錄因子的基因敲除豬。並利用這一突變豬作為卵巢早衰研究模型，進一步揭示卵巢早衰的發病機制，以及卵巢早衰發生過程中血液內各種生殖激素和基因表達的實時變化及其和卵巢早衰的相關性，以期發現血液內表達變化的卵巢早衰相關基因。
結題摘要
本研究擬通過建立FOXO3這一卵巢早衰密切相關轉錄因子的基因敲除豬。並利用這一突變豬作為卵巢早衰研究模型，進一步揭示卵巢早衰的發病機制，以及卵巢早衰發生過程中血液內各種生殖激素和基因表達的實時變化及其和卵巢早衰的相關性。項目的關鍵是豬基因工程模型的構建。原計畫利用ZFN技術進行受精卵注射得到基因敲除豬，但由於ZFN技術不成熟，實驗失敗了。為此，我們開展了基於受精卵注射的CRISPR/Cas9基因敲除技術的開發，世界上第一個通過受精卵注射利用CRISPR/Cas9構建基因敲除小鼠，並成功地高效得到了基因敲除豬。已發表第一作者單位，通訊和共同通訊作者文章3篇。其中一篇被引用超過了200次。
