《利用CRISPR/Cas9系統同源性修復蛋白C基因突變治療血栓性疾病》是依託武漢大學，由劉會擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：利用CRISPR/Cas9系統同源性修復蛋白C基因突變治療血栓性疾病
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉會
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
血栓形成及其併發症已成為世界範圍內致殘率和致死率最高的疾病之一，嚴重影響社會發展和經濟建設。人體促凝系統與抗凝系統的動態平衡複雜多變，抗栓治療措施不足時血栓易復發，抗栓藥物使用過量時易出血，相關疾病的安全、有效治療成為亟需解決的醫學難題。蛋白C是體內重要的天然抗凝因子，蛋白C基因突變導致的蛋白C缺乏症是遺傳性易栓症最常見的病因之一。本課題組通過前期研究發現，蛋白C基因的2種突變（c.565C＞T和c.574_576del）是中國人群血栓形成的常見危險因素。CRISPR/Cas9基因編輯系統通過sgRNA與DNA的特異性結合將Cas9蛋白靶向至特定基因區域實現對基因的編輯，已成功套用於單基因突變性遺傳病的基因治療研究。本項目擬利用sgRNA/Cas基因編輯技術（gRNA/Cas9）在活體細胞同源性修復蛋白C基因突變，從根源上移除致病突變，實現血栓性疾病的防治。
結題摘要
血栓形成及其併發症已成為世界範圍內致殘率和致死率最高的疾病之一，嚴重影響社會發展和經濟建設。人體促凝系統與抗凝系統的動態平衡複雜多變，抗栓治療措施不足時血栓易復發，抗栓藥物使用過量時易出血，相關疾病的安全、有效治療成為亟需解決的醫學難題。蛋白C是體內重要的天然抗凝因子，蛋白C基因突變導致的蛋白C缺乏症是遺傳性易栓症最常見的病因之一。本課題組通過前期研究發現，蛋白C基因的2種突變（c.565C＞T和c.574_576del）是中國人群血栓形成的常見危險因素。CRISPR/Cas9基因編輯系統通過sgRNA與DNA的特異性結合將Cas9蛋白靶向至特定基因區域實現對基因的編輯，已成功套用於單基因突變性遺傳病的基因治療研究。本項目成功構建sgRNA/Cas基因編輯體系在模型細胞體系中實行同源性修復蛋白C基因突變，體外實驗證實我們構建的sgRNA/Cas基因編輯體系對PROC c.565C＞T及PROC c.574_576del的穩轉蛋白C表達體系HDR修復效率分別為15%和9.9%。對細胞培養上清及細胞裂解液行WB及Elisa試驗證實，PC:Ag含量較突變型明顯增加，對細胞培養上清濃縮液行蛋白C活性檢測及TGT試驗證實蛋白C抗凝活性修復。有望通過此項技術，從根源上移除致病突變，實現血栓性疾病的防治。
