片段分泌方法從FCCL/HN株基因組DNA中PCR擴增P1332基因片段,P332-RO、P332-R1和P332-R2;用PCR擴增法合成鼠IgG輕鏈信號肽的編碼序列。
用定向克隆法分別構建分泌型重組質粒pcDNA3-s—P332-R0、pcDNAl-s—P332-R1、pcDNA3-s—P332-R2和非分泌型重組質粒pcDNA3-s—P332-R0、pcDNA3—s—P332-R1、pcDNA3—s—P332-R2。陽性克隆的重組質粒DNA經酶切、PCR擴增及測序鑑定。結果PCR擴增得到特異的FCCl/HN株P1332基因片段,P332-R0、P332-R1、P332-R1,大小分別為489、429和393bp。用PCR擴增法合成63bp的Balb/c小鼠IgG輕鏈信號肽的編碼序列。酶切、PCR及測序鑑定表明獲得了正確的含P1332基因片段的分泌型、非分泌型重組質粒。結論成功構建分別包含惡性瘧原蟲P1332基因片段-1332-R0、P332-R1和P332-R2的分泌型、非分泌型真核表達重組質粒。