分子生物學與基因工程實驗教程(2013年清華大學出版社出版的圖書)

基本信息

分子生物學與基因工程實驗教程

作者：杜昌升
定價：15元
印次：1-1
ISBN：9787302322610
出版日期：2013.06.01
印刷日期：2013.06.18

內容簡介

本實驗教程由兩大部分十大實驗組成，包括質粒提取、核酸回收、載體連線、 PCR 進行克隆鑑定、SDS-PAGE 以及Western blot 等。在系統進行一個基因克隆的同時讓學生全面掌握質粒、限制性內切酶、連線酶、感受態、轉化PCR 、重組蛋白表達及鑑定等基本操作；從而使學生鞏固基因工程學理論知識，並為將來進一步學習打下技術基礎。

目錄

第1部分　基因工程實驗

實驗1　重組質粒pcDNA3.0-ARRB的提取，質量檢測及酶切分析……3

1.1質粒提取4

1.2質粒質量檢測………………6

1.3質粒酶切7

1.4瓊脂糖凝膠電泳檢測………7

實驗2　用瓊脂糖凝膠電泳進行目的DNA片段的回收及質量檢測……11

1.1用瓊脂糖凝膠電泳進行目的DNA片段的分離…………………11

1.2從凝膠中回收目的DNA片段………………13

1.3DNA片段濃度及純度檢測15

實驗3　目的DNA片段與載體連線，感受態製備及連線產物的轉化……17

1.1連線反應…………………18

1.2感受態製備………………18

1.3連線產物轉化感受態細菌19

實驗4　PCR鑑定細菌克隆……23

1.1PCR鑑定克隆……………24

1.2瓊脂糖凝膠電泳…………26

實驗5　SDS-PAGE電泳及考馬斯亮藍染色分析目的蛋白的表達……27

1.1電泳膠的製備……………29

1.2蛋白樣品製備及SDS-PAGE電泳……………30

1.3轉膜…30

1.4考馬斯亮藍染色…………31

實驗6　Westernblot分析目的蛋白的表達………32

1.1SDS-PAGE電泳…………32

1.2轉膜…32

1.3封閉…33

1.4一抗孵育…………………33

1.5二抗孵育…………………33

1.6顯色…34

第2部分　分子生物學實驗

實驗7　大腸桿菌基因組DNA的提取與定量……37

實驗8　大腸桿菌生物素連線酶基因的RCR擴增及擴增產物的鑑定……43

實驗9　小鼠肝組織中總RNA的提取……………45

實驗10　逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）……47

附錄材料………50