《中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準:出口動物毒素(東亞鉗蠍毒)檢驗方法(SN/T 1040-2002)》是按照GB∕T1.1—1993《標準化工作導則第1單元：標準的起草與表述規則第1部分：標準編寫的基本規定》的要求編寫的。採用的方法主要是中華生物毒素聯合開發中心武漢大學毒素檢驗室1988年以來在工作實踐中使用的方法。其中急性毒性試驗（LD50測定）方法是採用張銑、劉毓谷教授主編《毒理學》（1997年版）中的霍恩氏（Horn）法。技術內容稍有變動。
基本介紹
- 書名：出口動物毒素
- 作者：中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局
- 出版日期：2002年5月1日
- 語種：簡體中文
- ISBN：155066214441
- 外文名：Examination Methods of AnimaI Toxin／Venom of the Scorpion Buthus Martensii)for Export
- 出版社：中國標準出版社
- 頁數：10頁
- 開本：16
- 品牌：北京勁松建達科技圖書有限公司
內容簡介,文摘,
內容簡介
《中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準:出口動物毒素(東亞鉗蠍毒)檢驗方法(SN/T 1040-2002)》由中國標準出版社出版。
文摘
著作權頁：
插圖：
6.5.1方法提要：利用鹼性溶液中的銅試劑與樣品中的蛋白質形成的銅一蛋白質複合物來還原磷鉬酸一磷鎢酸試劑，得到藍色的反應液，在650nm波長處測其吸光值，經標準曲線計算樣品蛋白質含量。
6.5.2試劑配製
a）4%碳酸鈉溶液：取4g碳酸鈉，加蒸餾水溶解成100mL。
b）0.2mol∕L氫氧化鈉溶液：取0.8g氫氧化鈉，加蒸餾水溶解成100mL。
c）0.04mol∕L硫酸銅溶液：取1g硫酸銅（CuSO4·5H2O），加蒸餾水溶解成100mL。
d）2%酒石酸鉀（或0.1mol∕L酒石酸鈉）溶液：取2g酒石酸鉀（或酒石酸鈉），加蒸餾水溶解成100mL。
e）鹼性銅液：臨用前，取試劑a）和b）各25mL，試劑c）和d）各0.5mL混勻配製而成。
f）酚試劑：稱取100ml，鎢酸鈉（Na2WO4·2H2O），25g鉬酸鈉（Na2MoO4·2H2O），置1500mL燒瓶中，加入700mL蒸餾水，50ml，85%磷酸及100mL濃鹽酸，上聯網流管（使用軟木塞或錫紙包裹
的橡皮塞），微沸回流10h，取下回流管，加150g硫酸鋰，50mL蒸餾水和幾滴溴液，煮沸約15min，驅除過量的溴。冷卻，加蒸餾水稀釋至1000mL，過濾，為酚試劑貯備液。
酚試劑貯備液經標準氫氧化鈉溶液滴定，測定酸濃度，而後用蒸餾水稀釋至相當於1mol∕L鹽酸濃度，即為酚試劑。
g）標準蛋白質溶液：取牛血清白蛋白標準品，用含0.02%疊氮鈉（NaN3）的蒸餾水準確稀釋至1mg∕mL，為標準蛋白質貯備液。精確量取標準蛋白質貯備液2.5mL於25mL燒瓶中，用含0.02%疊氮鈉（NaN3）的蒸餾水稀釋至刻度，即為100μg∕mL的標準蛋白質溶液。
6.5.3操作程式
6.5.3.1樣液製備：取適量樣晶，用含0.02%疊氮鈉（NaN3）的蒸餾水準確稀釋至100μg∕mL，再精確最取適量體積（含蛋白質50μg左右）於試管中，加5ml鹼性銅液，混勻，於室溫放置10min，快速加入0.5mL酚試劑，搖勻，於室溫放置30min，在650nm波長處測定吸光值（呈色後，如發現混濁，經3000r∕min離心15min後，再行測定）。
6.5.3.2標準曲線製作：精確量取100μg∕mL的標準蛋白質溶液：0，0.2，0.4，0.6.0.8,1.0mL，分別置於試管巾，加蒸餾水補至1mL，其餘操作同6.5.3.1。以各管中的標準蛋白質溶液的吸光值為縱坐標，測定用的毫升數為橫坐標作圖，即可得到一標準曲線。
6.5.3.3結果計算與表述
蛋白質含量以微克每毫克（μg∕mg）表示。
根據測得的樣液的吸光值，從標準曲線查出相當的標準蛋白質溶液的毫升數，按式（4）計算結果
X3=V1×100∕V2×0.1………………（4）
式中：X3——樣品蛋白質含量，μg∕mg；
V1——樣液的吸光值在標準曲線上查得的相當標準蛋白質溶液的毫升數；
V2——用於吸光值測定的樣液的毫升數。
6.6透明質酸酶活性測定
6.6.1方法提要：透明質酸酶能水解透明質酸，使其分子量變小，水溶性增大，濁度降低。通常以濁度降低表示酶的活性，並以125μg底物在37℃被酶水解，使其濁度降低50%的酶量作為一單位。通過測定底物酶作用前、後的光密度，求得酶的活性單位。
6.6.2操作程式
6.6.2.1試劑配製
試劑A：0.1mol∕L，pH6.0乙酸緩衝液，含有0.065mol∕L氯化鈉。
試劑B：0.035mol∕L溴化十六烷基三甲銨，使用0.05mol∕L，pH4.2乙酸緩衝液配製。
插圖：
6.5.1方法提要：利用鹼性溶液中的銅試劑與樣品中的蛋白質形成的銅一蛋白質複合物來還原磷鉬酸一磷鎢酸試劑，得到藍色的反應液，在650nm波長處測其吸光值，經標準曲線計算樣品蛋白質含量。
6.5.2試劑配製
a）4%碳酸鈉溶液：取4g碳酸鈉，加蒸餾水溶解成100mL。
b）0.2mol∕L氫氧化鈉溶液：取0.8g氫氧化鈉，加蒸餾水溶解成100mL。
c）0.04mol∕L硫酸銅溶液：取1g硫酸銅（CuSO4·5H2O），加蒸餾水溶解成100mL。
d）2%酒石酸鉀（或0.1mol∕L酒石酸鈉）溶液：取2g酒石酸鉀（或酒石酸鈉），加蒸餾水溶解成100mL。
e）鹼性銅液：臨用前，取試劑a）和b）各25mL，試劑c）和d）各0.5mL混勻配製而成。
f）酚試劑：稱取100ml，鎢酸鈉（Na2WO4·2H2O），25g鉬酸鈉（Na2MoO4·2H2O），置1500mL燒瓶中，加入700mL蒸餾水，50ml，85%磷酸及100mL濃鹽酸，上聯網流管（使用軟木塞或錫紙包裹
的橡皮塞），微沸回流10h，取下回流管，加150g硫酸鋰，50mL蒸餾水和幾滴溴液，煮沸約15min，驅除過量的溴。冷卻，加蒸餾水稀釋至1000mL，過濾，為酚試劑貯備液。
酚試劑貯備液經標準氫氧化鈉溶液滴定，測定酸濃度，而後用蒸餾水稀釋至相當於1mol∕L鹽酸濃度，即為酚試劑。
g）標準蛋白質溶液：取牛血清白蛋白標準品，用含0.02%疊氮鈉（NaN3）的蒸餾水準確稀釋至1mg∕mL，為標準蛋白質貯備液。精確量取標準蛋白質貯備液2.5mL於25mL燒瓶中，用含0.02%疊氮鈉（NaN3）的蒸餾水稀釋至刻度，即為100μg∕mL的標準蛋白質溶液。
6.5.3操作程式
6.5.3.1樣液製備：取適量樣晶，用含0.02%疊氮鈉（NaN3）的蒸餾水準確稀釋至100μg∕mL，再精確最取適量體積（含蛋白質50μg左右）於試管中，加5ml鹼性銅液，混勻，於室溫放置10min，快速加入0.5mL酚試劑，搖勻，於室溫放置30min，在650nm波長處測定吸光值（呈色後，如發現混濁，經3000r∕min離心15min後，再行測定）。
6.5.3.2標準曲線製作：精確量取100μg∕mL的標準蛋白質溶液：0，0.2，0.4，0.6.0.8,1.0mL，分別置於試管巾，加蒸餾水補至1mL，其餘操作同6.5.3.1。以各管中的標準蛋白質溶液的吸光值為縱坐標，測定用的毫升數為橫坐標作圖，即可得到一標準曲線。
6.5.3.3結果計算與表述
蛋白質含量以微克每毫克（μg∕mg）表示。
根據測得的樣液的吸光值，從標準曲線查出相當的標準蛋白質溶液的毫升數，按式（4）計算結果
X3=V1×100∕V2×0.1………………（4）
式中：X3——樣品蛋白質含量，μg∕mg；
V1——樣液的吸光值在標準曲線上查得的相當標準蛋白質溶液的毫升數；
V2——用於吸光值測定的樣液的毫升數。
6.6透明質酸酶活性測定
6.6.1方法提要：透明質酸酶能水解透明質酸，使其分子量變小，水溶性增大，濁度降低。通常以濁度降低表示酶的活性，並以125μg底物在37℃被酶水解，使其濁度降低50%的酶量作為一單位。通過測定底物酶作用前、後的光密度，求得酶的活性單位。
6.6.2操作程式
6.6.2.1試劑配製
試劑A：0.1mol∕L，pH6.0乙酸緩衝液，含有0.065mol∕L氯化鈉。
試劑B：0.035mol∕L溴化十六烷基三甲銨，使用0.05mol∕L，pH4.2乙酸緩衝液配製。
