冷凍切片術

是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然後進行切片的方法。因其製作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多套用於手術中的快速病理診斷。冷凍切片的種類較多，有低溫恆冷箱冷凍切片法，二氧化碳冷凍切片法，甲醇循環製冷冷凍切片法等。這些方法，隨著時代的變遷，科技的發展，許多年前被認為是非常重要的技術，現在也逐步被淘汰了。當然有些技術，如低溫恆冷箱冷凍切片法，正在受到青睞。

基本介紹

• 中文名：冷凍切片術
• 外文名：frozen section
• 製作方法：低溫恆冷箱冷凍
• 溫度：－15～－20℃

冷凍切片套用

（1）在手術進行中，突然發現病人的病變與原診斷，原定手術方案不相符合，或者懷疑時，需要病理確定。

（2）了解淋巴結內是否有轉移的腫瘤細胞，或者轉移的程度，以利於確定是否需要徹底掃除淋巴結或者其它的治療措施。

（3）對於已確定為惡性腫瘤的患者，則需要了解其手術範圍是否足夠，上下切緣是否有殘存的腫瘤組織。

（4）在做剖腹探查時所發現的腫塊或者異樣的組織。

（5）顯示組織中的脂肪和脂類物質，這常見於某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研組織等。

（6）某些酶的顯示如ATP酶，琥珀酸脫氫酶等。

（7）神經病理學技術中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal氏法，Hortega氏法和Holzer氏法等。

（8）對某些物質所進行的免疫螢光的研究。

製作方法

以Shandon As 620 E型恆溫箱冷凍切片機為例，該機的箱面上有電子控制板，裝有即時冷凍鍵和除霜鍵，啟動即時冷凍鍵，機器馬上進行工作狀態，並可持續10mins。啟動即時除霜鍵，可將工作間頂部後面的製冷柵上的霜除掉，並可持續15mins。有照明鍵一個，啟動該鍵可照明工作間，有利工作及觀察組織的冷凍狀況。配有消毒鍵一個，當進行一周的工作或者一天的工作後，啟動該鍵，可對工作間進行消毒。當每天工作完畢時，可啟動密鎖鍵，鎖住工作間。除此之外，箱面的左邊有四個按鍵，兩個為快速自動進退鍵，兩個為微小進退鍵，還有一個手動旋鈕，調節修組織塊時的進退。 　冷凍箱內左邊的冷凍台，溫度可達-60℃左右，冷凍箱的中間為一台切片機，工作間的溫度在0-30℃間可任意調節，並在箱面上的螢屏顯示出來。

注意事項

新鮮的組織

組織儘可能新鮮、驟冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的驟冷劑有：① CO2氣（－78℃） ② 丙酮乾冰冷卻的輕石油醚、乙烷和庚烷（－80℃） ③ 液氮（－190℃）④ 液氮冷卻的丙烷（－19℃）。液氮適用於組織化學，較安全。缺點：組織塊易發生龜裂。

固定組織

為防止水解酶和其他物質的移位、彌散，常用4℃、24小時的甲醛固定能很好地保存酶類。但對許多脫氫酶和轉移酶能滅活。故不宜使用，低溫，冷甲醛短時間固定（10分鐘左右）固定，可顯示琥珀酸脫氫酶。 　電鏡出現後，需要保存細胞的超微結構，以4%緩衝戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸（pH7．）84ml；蔗糖8g）固定較好。這些固定液主要用於水解酶，而不適於許多氧化還原酶和轉移酶。

恆冷箱溫度

一般在冷凍後10分鐘，到接近冷室溫度時再切，一般組織在－15～－20℃切片最易成功。每種組織有其合適的切片溫度、刀的溫度和冷室溫度，Pearse及Bancroft的經驗如下：

組織 刀溫度 組織溫度 恆冷箱溫度

肝 -18 -10 -5 　腎 -15 -8 -5 　皮膚 -35 -10 -5 　腦 -18 -5 -5 　固定組織一般高3-5度

切片機的使用

抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離，使切片平滑通過。抗卷板略高於刀面的最高點。可憑經驗調整刀對組織的角度，一般新刀為20゜。操作程式：先接通電源，調定恆冷箱溫度，調整切片刀的角度，調定切片厚度，標本置載台致冷達所需溫度後，將其安放在切片機推進器上。即可切片。 恆冷箱視使用情況每周或每月清潔一次冰霜。新刀切片滿意，舊刀用自動磨刀機磨刀較好。如果切片刀與抗卷板的位置，角度合乎要求，又有一把銳利的刀，就能獲得理想的切片。