內標法（Internal Standard Method）是將一定重量的純物質作為內標物（參見內標物條）加到一定量的被分析樣品混合物中，然後對含有內標物的樣品進行色譜分析，分別測定內標物和待測組分的峰面積（或峰高）及相對校正因子，按公式即可求出被測組分在樣品中的百分含量。內標法是色譜分析中一種比較準確的定量方法，尤其在沒有標準物對照時，此方法更顯其優越性。
基本介紹
- 中文名：內標法
- 外文名：Internal Standard Method
- 目的：測定被測組分在樣品中的百分含量
- 注意事項：內標物的選擇需要謹慎
概念與原理,內標物,定義,選擇要求,影響因素,內標法的特點,優點,缺點,注意事項,
概念與原理
內標法是將一定重量的純物質作為內標物加到一定量的被分析樣品混合物中，根據測試樣和內標物的質量比及其相應的色譜峰面積之比及相對校正因子，來計算被測組分的含量。
其中As和Ar分別為內標物和對照品的峰面積或峰高，ms和mr分別為加入內標物和對照品的量。
再取含有內標物的待測組分溶液進樣，記錄色譜圖，再根據含內標物的待測組分溶液色譜峰回響值，計算含量（mi）：
其中 Ai和As分別為待測物和內標物的峰面積或峰高，ms為加入內標物的量。必要時，再根據稀釋倍數、取樣量和標示量折算成為標示量的百分含量，或根據稀釋倍數和取樣量折算成百分含量。
內標物
定義
將一個已知質量的純物質，加入至待測樣品溶液中，以此純物質的量為標準，對比測定待測組分的含量，該純物質稱為內標物。
選擇要求
a．原樣品中不含組分
b．與待測物保留時間應接近,但不重疊
c．為高純度標準物質，或含量已知物質
d.在給定色譜條件下具有一定化學穩定性。
影響因素
影響內標和被測組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學方面的、色譜方面的和儀器方面的三類。
由化學方面的原因產生的面積比的變化常常在分析重複樣品時出現。
化學方面的因素包括：
1、內標物在樣品里混合不好；
2、內標物和樣品組分之間發生反應，
3、內標物純度可變等。
對於一個比較成熟的方法來說，色譜方面的問題發生的可能性更大一些，色譜上常見的一些問題對絕對面積的影響比較大，對面積比的影響則要小一些，但如果絕對面積的變化已大到足以使面積比發生顯著變化的程度，那么一定有某個重要的色譜問題存在，比如進樣量改變太大，樣品組分濃度和內標濃度之間有很大的差別，檢測器非線性等。進樣量應足夠小並保持不變，這樣才不致於造成檢測器和積分裝置飽和。如果認為方法比較可靠，而色譜固看來也是正常的話，應著重檢查積分裝置和設定、斜率和峰寬定位。對積分裝置發生懷疑的最有力的證據是：面積比可變，而峰高比保持相對恆定。
內標法的特點
優點
1.測定的結果較為準確，由於是通過測量內標物及被測組分的峰面積的相對值來進行計算的，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差。
2. 操作過程中樣品和內標是混合在一起注入色譜柱，因此只要混合溶液中被測組分與內標的量的比值恆定，上樣體積的變化不會影響影響定量結果。
3.內標法抵消了上樣體積，乃至流動相、檢測器的影響。
缺點
1.操作程式較為麻煩。
2.有時尋找合適的內標物也有困難。
注意事項
當配製校正因子測定用的對照溶液和含有內標物質的待測組分溶液使用同一份內標物質溶液時，則配製內標物質溶液不必精密稱（量）取。
採用內標法定量時，內標物的選擇是一項十分重要的工作。理想地說，內標物應當是一個能得到純樣的已知化合物，這樣它能以準確、已知的量加到樣品中去，它應當和被分析的樣品組分有基本相同或儘可能一致的物理化學性質(如化學結構、極性、揮發度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和回響特徵，最好是被分析物質的一個同系物。當然，在色譜分析條件下，內標物必須能與樣品中各組分充分分離。需要指出的是，在少數情況下，分析人員可能比較關心化合物在一個複雜過程中所得到的回收率，此時，他可以使用一種在這種過程中很容易被完全回收的化合物作內標，來測定感興趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所說的選擇原則。
