免疫電泳法是將抗原樣品在瓊脂平板上先進行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開，然後加入抗體做雙相免疫擴散，把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴散而使其相遇，在二者比例適當的地方，形成肉眼可見的沉澱弧。
基本介紹
- 中文名：免疫電泳法
- 技術：凝膠電泳和雙向免疫擴散
- 材料：1%離子瓊脂等
- 儀器：電泳儀
簡介,實驗方法,結果,
簡介
免疫電泳法是指利用凝膠電泳與雙向免疫擴散兩種技術結合的實驗方法。在電場作用下標本中各組分因電泳遷移率不同而分成區帶，然後沿電泳平行方向將凝膠挖一溝槽，將抗體加入溝槽內，使抗原與抗體相互擴散而形成沉澱線。根據沉澱線的數量、位置及形狀，以分析標本中所含組分的性質，本實驗常用於抗原分析及免疫性疾病的診斷。此法在微量的基礎上具有解析度高，靈敏度高，時間短，是很理想的分離和鑑定蛋白質混合物的方法。用於抗原、抗體定性及純度的測定。
【材料】
1%離子瓊脂（pH8.6巴比妥緩衝液加入等量蒸餾水，再加入1%瓊脂，溶解後用脫脂棉過濾，分裝試管，實驗前加熱溶解置56~60℃水浴箱中平衡溫度備用）。
免疫電泳用玻片
待檢血清
人IgG（1mg/ml）
抗人全血清抗體
微量加樣器及塑膠吸頭
尖吸管及橡皮吸頭
打孔器、解剖刀、尺、打孔模板、濕盒等。
電泳儀：將pH8.6巴比妥緩衝液注入電泳槽內（注意正負極各槽內所加入的量應在同一水平），並將濾紙裁成適當長度和寬度以備搭橋使用。
附：pH8.6巴比妥緩衝液配製方法
巴比妥鈉（Barbital Sodium）10.3g
巴比妥酸（Barbituric Acid）1.84g
蒸餾水1000ml
1．稱量巴比妥酸置一三角燒瓶中加蒸餾水200ml於煮鍋內加熱溶解。
2．稱量巴比妥鈉置另一容器中加蒸餾水700ml，搖動溶解。
3．將已融化的巴比妥酸溶液與巴比妥鈉溶液混合，用蒸餾水補足1000ml。
4．混勻後，用精密pH試紙測定pH值，備用。
實驗方法
1．取已溶化的1%離子瓊脂傾注於玻片上製成瓊脂板。
2．冷卻凝固後，按照模板於挖槽線上下兩側各打孔一個，並分別用微量加樣器加入待檢血清及人IgG各15μl。
3．置電泳槽內，注意電泳標本應放負極“―”一側。並將已浸透緩衝液的濾紙一端覆蓋於瓊脂板兩側各約0.5mm，另一端浸於電泳液中。
4．接通電源。電壓、電流及時間應視儀器性能而定。一般電勢梯度6V/cm，電流每板20mA，泳動時間1~2小時。
5．電泳完畢，關閉電源，取出瓊脂板。按模板位置用解剖刀挖橫槽，用特製尖吸管加入抗人全血清抗體。
6．置濕盒中，於37℃溫箱中擴散24小時。
結果
根據沉澱弧的位置及形狀，參照免疫球蛋白遷移範圍示意圖，識別主要Ig。
