《先天性青光眼關鍵候選基因的序列分析及功能學研究》是依託復旦大學，由陳雪莉擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：先天性青光眼關鍵候選基因的序列分析及功能學研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：陳雪莉
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
先天性青光眼(PCG)是一種嚴重危害嬰幼兒視力發育的疾病，與遺傳高度相關。本項目基於已收集到的238例散發病例和180個核心家系，我們在前期研究中，已經用測序的方法對致病基因CYP1B1進行了篩查，其突變率僅17.2%；又對基因座GLC3C的STR及SNP分型，通過核心家系的傳遞不平衡檢驗（TDT分析），證實了該基因座的存在，並將高風險單倍型的陽性區域鎖定在22Kb範圍。本項目擬在現有的工作基礎上對候選區域內（22Kb±1Mb）關鍵候選基因進行突變篩查，並從中鑑定出新的致病/易感基因。.過去唯一鑑定證實的PCG基因，僅覆蓋了中國漢族散發病例的一少部分，非常有必要鑑定出代表中國漢族PCG人群基因背景的致病基因，而最新報導的位於該位點下游的基因LTBP2也亟待在漢族患者中突變篩查。一旦這項研究獲得成功，有助於揭示青光眼的發病原因與病理機制，進而為今後遺傳諮詢、產前診斷的開展提供分子遺傳學依據。
結題摘要
先天性青光眼(PCG)在新生兒中的罹患率約為1:10000，對於此罕見病本項目在課題進行的第一年新徵集散發病例核心家系40例，收集到患者及雙親的外周血標本並進行眼部詳細檢查，採集臨床資料，包括：單/雙眼發病、起病年齡、起病眼壓、角膜橫徑、眼底視乳頭杯/盤比等，共收集散發病例數275例。在實驗及數據分析方面，外周血DNA抽提工作全部完成；根據基因分型結果，對核心家系進行傳遞不平衡檢驗，驗證了GLC3C位點的在中國漢族PCG患者的真實存在；對CYP1B1基因測序篩查後，對CYP1B1基因型-表現型-臨床療效進行多因素回歸分析，發現該基因與疾病特徵和手術療效間的規律；對LTBP2基因的36個外顯子進行了大規模測序，將各個外顯子測序檔案與標準序列比對，發現部分外顯子序列突變，檢索人類基因組資料庫，鑑定其為多態/突變序列。本研究發現的兩例突變一個為已報導的位於7號外顯子c.1415delC的雜合突變，產生的編碼胺基酸突變為p.285開始移碼，位於LTBP2蛋白的表皮生長因子的第12個鈣離子結合域。另一個突變位點為c.3904C＞T的雜合突變，產生的編碼胺基酸突變為p.1204A＞V，位於蛋白質的髮夾樣結構摺疊區域。進一步我們還對CYP1B1和LTBP2基因功能學進行了研究：①對人眼房角組織（包含部分透明角膜、小梁網、虹膜，來源於青光眼患者小梁切除術中）進行Real-Time PCR分析，LTBP2表達量高於過去已驗證的CYP1B1表達量。②對人眼小梁切除組織（包含部分透明角膜、小梁網、虹膜根部）進行HE染色和免疫組織化學分析，該部位均有兩種基因的表達。在成果轉化方面，目前已發表標註基金資助SCI 論文兩篇：①驗證了GLC3C位點在中國漢族PCG患者的真實存在，並將高風險單倍型（TAACG）的陽性區域鎖定在一個很小的區域（22Kb）。該區域與基因座GLC3D的物理位置接近，GLC3D位點新鑑定出基因LTBP2，與我們所證實的區域相隔約3Mb。我們將結果發表在雜誌“Frontier in Bioscience”上；②對CYP1B1基因突變型-表現型-手術療效進行了多因素回歸分析，結果發表在“British Journal of Ophthalmology”上。
