《傳染性脾腎壞死病毒結構蛋白VP71的功能研究》是依託中山大學，由董傳甫擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：傳染性脾腎壞死病毒結構蛋白VP71的功能研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：董傳甫
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
傳染性脾腎壞死病毒（ISKNV）是虹彩病毒科腫大細胞病毒屬的代表種，是國內養殖鱖暴發性傳染病的明確病原。我們最近的研究證實ISKNV結構蛋白VP71與主衣殼蛋白（MCP）、VP71自身及宿主編碼電壓依賴性陰離子通道2（VDAC-2）存在相互作用，提示VP71可能作為毒力因子參與病毒對宿主的入侵或致病。為揭示VP71的功能，本研究擬通過：（一）VP71、MCP和VDAC-2的互動共定位實驗研究三者的功能性主導關係；（二）斑馬魚胚胎模型研究過表達VP71或VDAC-2的生物學效應及其可能信號通路；（三）利用CRISPR/Cas9技術和改良的重組病毒技術分別構建VDAC-2敲除穩定細胞系和VP71缺失重組病毒，研究缺失兩者之一或兩者共缺失後的病毒學特性。本研究將從宿主和病毒角度揭示VP71的功能，研究結果對於發掘ISKNV的新的毒力基因從而推動其新型減毒活疫苗的研製具有重要科學意義和套用價值。
結題摘要
傳染性脾腎壞死病毒（ISKNV）是廣泛的淡、海水名貴養殖魚類的重要病毒性病原，我們最近已經研製出針鱖ISKNV的高效滅活疫苗，2020年初獲得農業農村部的新獸藥註冊證書。結構蛋白是介導病毒感染和誘導宿主產生保護性免疫的關鍵因子，但總體而言，國際上對該類病毒結構蛋白功能的了解還非常有限。我們此前的工作顯示，ISKNV-ORF071編碼蛋白VP71是病毒的較低豐度結構蛋白，進一步的研究還發現VP71與病毒的主衣殼蛋白（MCP）和宿主蛋白VDAC-2存在相互作用。作為虹彩病毒的最高豐度結構蛋白，MCP在虹彩病毒結構中起著關鍵的病毒骨架作用，此外，VDAC-2作為重要的線粒體膜蛋白，具有非常重要的生物學功能，VP71與MCP和VDAC-2同時存在相互作用，是否提示VP71在ISKNV和宿主的感染與免疫相互作用關係中發揮了重要的調節作用，非常值得研究。 本研究的核心結果包括：（1）生物信息和生化實驗顯示，ISKNV-VP71是一個核仁定位病毒結構蛋白，過表達VP71對MFF-1細胞和斑馬魚胚胎無顯著影響；（2）綜合生物學研究證實，VP71和MCP，mVDAC-2及VP71本身存在相互作用，由於MCP與mVDAC-2不存在相互作用，MCP-VP71-VDAC-2可能形成了以VP71為核心的蛋白複合物；（3）用改進的重組病毒方法構建了VP71缺失ISKNV病毒（ISKNV-VP71），結果顯示ISKNV-VP71感染依然可上調mVDAC-2的表達，但mVDAC-2不能整合進入ISKNV-VP71的病毒粒子，再次提示mVDAC-2是通過與VP71相互作用整合進入成熟病毒粒子（4）感染試驗顯示 VP71-ISKNV相比wt-ISKNV對鱖魚具有更高的致死性，其機制為何需要做進一步的研究；（5）mVDAC-2上調錶達可誘導宿主細胞凋亡，ISKNV感染可上調mVDAC-2的表達，提示mVDAC-2上調錶達誘發的晚期細胞凋亡是ISKNV釋放的主要途徑之一。敲降或敲除mVDAC-2對ISKNV的致病、感染和釋放有何影響？非常值得研究。我們試圖通過CRSPR/CAS9技術構建斑馬魚zfVDAC-2敲除動物模型和細胞模型，但由於實驗周期過長，目前還需要時間獲得雙等位基因缺失斑馬魚模型（zfVDAC-2），因此本研究的謎底還未完全揭開。
