細胞數量達飽和密度後，細胞遂停止增殖，進入停滯期。此時細胞數量不再增加，故也稱平頂期（Plateau）。停滯期細胞雖不增殖，但仍有代謝活動，繼而培養液中營養漸趨耗盡，代謝產物積累、pH降低。此時需做分離培養即傳代，否則細胞會中毒，發生形態改變，重則從底物脫落死亡，故傳代應越早越好。指細胞自移植於新培養基時起，至開始出現活躍繁殖的這一期間。一般被移植的細胞越是培養後期的，其停滯期越長。其原因是培養後期的細胞群在一定程度上進行同步化，而G1期的細胞比例高，進入分裂期需要時間；另外來自原培養期間所受的退行性變化的恢復也是重要的原因。
