《中華人民共和國國家標準 保健食品中異嗪皮啶的測定》由中華人民共和國衛生部提出並歸口，中國疾病預防控制中心營養與食品安全所負責起草，規定了保健食品中異嗪皮啶的測定方法，適用於以刺五加為主要原料的保健食品中異嗪皮啶的測定。
基本介紹
- 中文名： 保健食品中異嗪皮啶的測定
- 外文名：Determination of isofraxidin in health foods
- 標準號：GB/T 22245-2008
- 實施日期：2008-11-01
- 發布日期：2008-07-31
- 發布部門：衛生部、國家標準化委員會
前言,範圍,原理,試劑和材料,儀器和設備,分析步驟,試樣處理,標準曲線的製備,液相色譜參考條件,結果計算,精密度,色譜圖,
前言
本標準由中華人民共和國衛生部提出並歸口。
本標準負責起草單位:中國疾病預防控制中心營養與食品安全所。
本標準參加起草單位:河北省疾病預防控制中心。
本標準主要起草人:楊大進、方從容、王竹天、常鳳啟、宋鳳英。
本標準為首次發布。
範圍
本標準規定了保健食品中異嗪皮啶的測定方法。
本標準適用於以刺五加為主要原料的保健食品中異嗪皮啶的測定。
當取樣量2.0g，定容至10mL，進樣量10μL時，方法的檢出限（LOD）為2×10-4g/kg，方法的定量限（LOQ）為6×10-4g/kg，線性範圍為2.0μg/mL~40μg/mL。
原理
根據異嗪皮啶易溶於甲醇、乙腈、三氯甲烷的理化特性，試樣中異嗪皮啶依次經甲醇和三氯甲烷兩種溶液提取，甲醇定容，過濾後進高效液相色譜儀，經反相C18色譜柱分離後，由紫外檢測器檢測，根據根據保留時間和峰面積進行定性和定量。
試劑和材料
- 甲醇：優級純。
- 乙酸：分析純。
- 乙睛：色譜純。
- 三氯甲烷：分析純。
- 水：為實驗室一級用水，電導率（25℃）為0.01mS/m。
- 異嗪皮啶標準品:純度≥99%。
- 異嗪皮啶標準儲備液（1.00mg/mL）：準確稱量異嗪皮啶標準品0.01g(精確至0.0001g)，置於10mL容量瓶中，加入甲醇溶解並定容至刻度，混勻（此標準溶液在4℃冰櫃中，可保存7d）
- 異嗪皮啶標準使用液（100μg/mL）：吸取異嗪皮啶標準儲備液1.00mL於10mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，混勻（此標準溶液在4℃冰櫃中，可保存7d）。
儀器和設備
高效液相色譜儀：附紫外檢測器或二極體陣列檢測器。
超音波清洗器。
分析步驟
試樣處理
根據試樣含量，稱取0.5g~5g均勻試樣(精確稱至0. 001 g)置於25 mL試管中，加人甲醇20 mL,超音波提取20 min後，過濾，用20 mL甲醇分3次洗滌殘渣，收集全部濾液，於水浴上蒸乾，加適量水溶解並轉移到分液漏斗中，用30 mL三氯甲烷分二次萃取，合併三氯甲烷萃取液，於水浴上蒸乾，加甲醇溶解並定容至2. 0 mL，過0. 45μm濾膜，濾液備用。
標準曲線的製備
用甲醇稀釋標準使用液，配製成異嗪皮啶標準溶液濃度分別為2. 00 μg/mL, 4. 00μg/mL,8.00μg/mL,10.0 μg/mL,20.0 μ.g/mL,40.0μg/mL作為標準系列。
液相色譜參考條件
- 色譜柱:ODS C18柱，250 mm X 4.6 mm，5 μm。
- 柱溫:35℃。
- 紫外檢測器:檢測波長343 nm。
- 流動相:乙睛+0. 1%乙酸溶液=15+85。
- 流速:1.0 mL/min。
- 進樣量:10μL 。
- 色譜分析:取標準溶液及試樣溶液注人色譜中，以保留時間定性，以試樣峰面積或峰高與標準比較定量。
結果計算
試樣中異嗪皮啶的含量按式(1)進行計算:
式中:
X—試樣中異嗪皮啶的含量，單位為克每千克(g/kg);
c—由標準曲線求得進樣液中異嗪皮啶的濃度，單位為微克每毫升(ug/mL) ;
V—試樣定容體積，單位為毫升(mL);
m—試樣的質量，單位為克(g) 。
計算結果保留三位有效數字。
精密度
在重複條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對值不超過算術平均值的10%。
色譜圖
在上述色譜條件下的色譜圖見圖1~圖2。
圖1 異嗪皮啶標準色譜圖
圖2 異嗪皮啶試樣色譜圖