《促進腫瘤凋亡的融合蛋白CPP-TRAIL-ARTS C27的製備及機制研究》是依託四川大學，由易成擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：促進腫瘤凋亡的融合蛋白CPP-TRAIL-ARTS C27的製備及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：易成
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
凋亡逃避是惡性腫瘤發生髮展及治療耐受的主要原因。腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體（TRAIL）因具有極好的靶向性及較少的副作用，成為極具潛力的抗腫瘤藥物。但凋亡途徑中任一環節的改變也可導致TRAIL耐藥，因此，內源性及外源性雙途徑同時促凋亡將有力解決部分腫瘤細胞耐藥問題。TGF-β信號通路的凋亡相關蛋白（ARTS）因可抑制XIAP而通過內源性途徑促進凋亡而受到關注。如果能穿透細胞膜靶向輸送促凋亡蛋白到達腫瘤細胞胞漿，則可高效地起到促凋亡作用。本項目在既往工作基礎上，利用細胞穿膜肽CPP與蛋白TRAIL及ARTS C27融合，發揮靶向促凋亡作用。本研究為開發新的腫瘤靶向藥物，探索促腫瘤細胞凋亡的新思路奠定基礎。
結題摘要
凋亡逃避是惡性腫瘤發生及耐藥的主要原因，腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體具有較好的靶向性及較少的副作用，為二十年來極具潛力的在研抗腫瘤藥物。國際上多個凋亡受體激動劑在臨床試驗中因為（1）溫和的抑瘤作用；（2）有限的治療反應；（3）部分病例缺乏臨床受益而處於停滯狀態。 項目完成了TRAIL穿膜肽樣突變體和TRAIL穿膜肽融合蛋白兩類28個突變體基因表達載體的構建和表達，獲得了蛋白樣品。採用50餘株腫瘤細胞系對樣品進行體外生物活性篩選，得到了TRAIL-Mu3、TRAIL-MuR5、TRAIL-MuR6、MuR5S4TR和MuR6S4TR 5個具有優良活性的蛋白質。項目建立了TRAIL-Mu3和MuR5S4TR兩個蛋白中試製備工藝，進行了裸鼠移植瘤模型抗腫瘤試驗。 細胞水平及動物水平進行了突變體的流式細胞術，FITC螢光標記細胞穿膜作用，凋亡信號通路因子，配體受體親和解離曲線分析，死亡受體DR4/DR5，不同階段凋亡酶Caspase s，凋亡抑制因子XIAP表達分析等機理研究。 結果表明，與野生型TRAIL相比，TRAIL-Mu3和MuR5S4TR具有：（1）更高的抑瘤作用，對於敏感細胞其生物活性提高了10000倍；（2）更高的藥物敏感率，對隨機選擇的32株腫瘤細胞的敏感率近80%（野生型TRAIL為40%）；（3）更高的安全性，TRAIL-Mu3和MuR5S4TR單次給藥1000~1500mg/kg時，小鼠未達到最大耐受量。TRAIL-Mu3及MuR5S4TR能明顯抑制人肺癌、結直腸癌、胰腺癌細胞裸鼠移植瘤的生長，其特點為：（1）單用抑瘤作用強於臨床一線化療藥物，如紫杉醇、吉西他濱等，單用抑瘤率超過80%；（2）作用持久，全療程持續抑制腫瘤的生長；（3）動物無死亡及臨床可見的不良反應，治療中動物體重增長。體內外作用顯示TRAIL-Mu3和MuR5S4TR具有較高的受體親和力，能穿透細胞膜進入細胞漿，具有穿膜作用，同時上調腫瘤細胞死亡受體DR4/DR5，提高凋亡各個階段Caspases的表達，部分腫瘤細胞下調凋亡抑制因子XIAP的表達。 綜上，本研究採用新思路、建立新方法，獲得了TRAIL-Mu3和MuR5S4TR兩個優良抗腫瘤候選蛋白質，在治療效果、安全性、成藥性方面具有較大優勢，值得深入進行套用開發及機理研究。
