《促孕複方有效部位DS1-47的活性成分與促進著床機制研究》是依託華中科技大學，由吳雲霞擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：促孕複方有效部位DS1-47的活性成分與促進著床機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：吳雲霞
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
複方中藥的藥效物質、質量控制與作用機制是限制中藥運用發展的瓶頸。促孕複方為多年臨床經驗方藥進一步經COH著床障礙模型優選處方，DS1-47為繼續運用COH模型從該方中篩選得到的有效部位（其中總黃酮含量33.78%，總皂苷含量40.42%），其促進著床效果得到提高且對正常妊娠未見不良影響。本研究將運用LC-MS對DS1-47進行指紋圖譜分析，用代謝組學方法研究DS1-47在小鼠體內經代謝後在血清中的化學成分圖譜，將血清成分圖譜與原指紋圖譜進行對照，運用主成分分析法結合藥效評價確定其主要藥效化學成分，並建立DS1-47有效質量控制標準。此外，用蛋白組學LCM-DE-MS技術路線研究分析DS1-47作用後在子宮、卵巢組織細胞中受調節的蛋白分子，闡明其藥效作用機制。本課題研究將為研發質量可控、主要藥效物質清楚及作用機制明確的現代促孕中藥新藥奠定堅實的基礎。
結題摘要
對促孕複方進行梯度極性系統的萃取和柱層析分離，結合COS著床障礙動物模型篩選促著床活性成分，對活性組分進行單一法與去一法篩選，確定得到由14個部位組成的活性組合成分，命名為DS-1-47。制定了DS-1-47的液相指紋圖譜技術參數，有13個共有峰，相似度在0.94以上。分別運用超排卵模型和吲哚美辛著床障礙小鼠模型，蛋白組學雷射捕捉顯微切割技術-二維電泳-質譜 (laser capture microdissection-double dimensional electrophoresis-mass spectrum，LCM-DE-MS)篩選DS-1-47促著床的靶點蛋白質。方法為將各組子宮組織粉碎，進行雙向凝膠電泳實驗，染色，掃描膠條，分析凝膠電泳圖，進行蛋白質差異化比較，得到含量改變的蛋白質，選取有顯著性變化的蛋白質點做質譜分析。超排卵模型中，正常（CN）組、超排卵模型（CM）組和超排卵模型中藥（CZ）組有15種蛋白質表達發生明顯改變。和CN組相比，CM組有3種蛋白質明顯表達下調，CZ組較之CM組明顯表達上調；有12種蛋白質CM組較之CN組明顯上調，但是CZ組較之CM組明顯下調；CM組上調， 但是CZ組下調的蛋白質被鑑定為血液結合素，肌肽原-1、絲氨酸蛋白酶抑制劑A3K、α-1-抗胰蛋白酶1-3，結合珠蛋白、延伸因子-1-Δ、膜聯蛋白A5、血清澱粉樣蛋白P-成分；CM組下調但是CZ組上調的蛋白質為肝羧酸酯酶、絲氨酸蛋白酶抑制劑、載脂蛋白A-I。吲哚美辛模型中，正常（IN）組、吲哚美辛模型（IM）組和吲哚美辛中藥（IZ）組有23種蛋白質表達發生明顯改變，和IN組相比，有7種蛋白質IM組較之IN組明顯下調，但是IZ組較之IM組明顯上調；有16種蛋白質IM組較之IN組明顯上調，但是IZ組較之IM組明顯下調；除了一些結構構成性蛋白，下調的蛋白包括膠原蛋白 α-1 (VI) 鏈，角蛋白7，角蛋白14，肌球蛋白調節輕鏈12B，肌球蛋白輕多肽9，熱休克蛋白β-7，C-U-編輯酶APOBEC-2；上調的重要蛋白包括載脂蛋白A-I，鈣調蛋白3，增生細胞核抗原，L-木酮糖還原酶，鈣結合蛋白。總之，發現下調的蛋白多與應激和免疫相關，上調的蛋白多與增生相關，這些蛋白均是參與調節著床的重要蛋白，也表明了LCM-DE-MSl方法篩選中藥調節著床靶點分子有一定的科學意義。
