供體特異性抗體在小腸移植排斥反應中作用機制研究

《供體特異性抗體在小腸移植排斥反應中作用機制研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由吳國生擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：供體特異性抗體在小腸移植排斥反應中作用機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：吳國生
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

小腸移植遠期療效不理想，慢性排斥反應是導致該問題的關鍵因素。雖然針對T細胞的治療措施能有效地減輕急性排斥反應，但未解決移植小腸長期存活與誘導免疫耐受形成問題。我們的研究發現，小腸移植術後的排斥反應，不僅與T細胞，而且還與B細胞及其分泌的抗體密切相關；提示除針對T細胞的治療之外，還有賴於有效地控制B細胞及其分泌的抗體，才能保證移植小腸的長期存活。因此，本課題擬套用小鼠小腸移植模型、B細胞剔除以及抗體分泌抑制技術，通過：（1）建立小鼠小腸移植模型，觀察免疫球蛋白缺陷對術後排斥反應的時間、類型和嚴重程度的影響；（2）探討輸入供體特異性抗體對重建動物的排斥反應能力影響；（3）觀察阻斷T細胞依賴性B細胞抗體分泌或補體激活能否防止或延緩慢性排斥反應等研究，闡明B細胞及其分泌的抗體在小腸移植中的作用機理。為進一步揭示排斥反應的發病機制，探討新的防治策略，提高小腸移植治療水平提供理論依據和技術方法。

結題摘要

摘要：小腸移植術後的排斥反應不僅與T細胞，而且與B細胞及其分泌的抗體密切相關。臨床上除針對T細胞的治療之外，還有賴於有效地控制B細胞及其分泌的抗體，才能保證移植小腸的長期存活。本項研究擬通過小鼠小腸移植模型，研究抑制B細胞及其抗體分泌對急性和慢性排斥反應的影響，從而延長移植物的存活時間。方法：（1）建立原位小鼠小腸移植模型；（2）利用免疫球蛋白缺陷小鼠和輸入外源性抗體，研究供體特異性抗體與排斥反應的關係；（3）通過阻斷共刺激信號通路，研究對T細胞依賴性抗體分泌和慢性排斥反應的影響；（4）利用抗補體C5抗體，研究抑制補體活化途徑是否能夠延緩排斥反應。結果表明，B10.A移植到野生型C57BL/6小鼠迅速發生急性排斥反應，而在免疫球蛋白缺陷小鼠30%移植物存活時間達15天以上。ELISA方法顯示兩組動物血清IL-2, IFN-γ, IL-4, 和 IL-10水平無明顯差別，說明免疫球蛋白缺陷小鼠具有正常的細胞免疫功能。在野生型小鼠移植物CD4和CD8陽性細胞浸潤，IgG、IgM和補體沉積；而在免疫缺陷小鼠免疫沉積物明顯減少。研究表明，給免疫缺陷小鼠輸入供體特異性IgG2b單抗能夠恢復排斥反應能力。實驗進一步研究了阻斷共刺激信號通路對抗體分泌和小腸移植排斥反應的作用。移植後給予CTLA4Ig單抗不能阻止野生型小鼠發生排斥反應，但能延長T細胞免疫缺陷小鼠移植物存活時間。聯合使用CTLA4Ig和抗CD154單抗能夠降低抗體分泌，顯著延長移植小腸存活時間。利用第三方皮膚試驗，證明長期存活小鼠未發生免疫耐受。本課題還利用小鼠模型探討阻斷補體活化途徑對小腸排斥反應的作用。實驗顯示，將B10.A小鼠皮膚移植到C57BL/6小鼠，二周后即可產生供體特異性抗體。小腸移植後迅速出現排斥反應，移植腸黏膜下廣泛血栓形成和補體沉積，符合抗體介導的排斥反應表現。採用抗C5補體抗體阻斷抗體活化途徑，再結合低劑量他克莫司能夠阻止急性排斥反應。實驗證明抑制補體活化有望成為防治致敏病人排斥反應的重要手段之一。總之，小腸移植排斥反應與供體特異性抗體有密切聯繫，抑制抗體可以明顯延長排斥反應的發生時間，為進一步揭示排斥反應的發病機制，探討新的防治策略，提高小腸移植治療水平提供理論依據和技術方法。