《低頻超聲協同聲諾維促miR-101靶向治療AD的實驗研究》是依託華中科技大學，由周潔擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：低頻超聲協同聲諾維促miR-101靶向治療AD的實驗研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：周潔
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
人口日趨老齡化使阿爾茨海默病(AD)成為當今社會最為嚴峻的課題之一。β澱粉樣蛋白(Aβ)是造成AD的元兇，然而由於血腦屏障，目前針對Aβ為靶點的治療手段有限。新近發現miRNA-101在海馬組織中表達，是APP（Aβ前體）的負性調節子，在下調APP同時還抑制炎症因子COX-2的表達。我們前期研究顯示：快速老化小鼠SAMP8海馬區miRNA-101水平顯著下降；且miRNA-101過表達可顯著抑制N2a細胞Aβ的生成。在此基礎上，選擇APP為靶點，擬構建神經元特異性NSE啟動子控制的miRNA-101表達重組體，套用低頻超聲協同SonoVue微泡開放靶區血腦屏障，結合NSE啟動子，實現靜脈給藥途徑下miRNA-101靶向表達於SAMP8鼠海馬區神經元內，進而對Aβ生成和炎症反應起雙重抑制作用。有望克服常規藥物和基因治療可控性差、組織細胞特異性不高、毒副作用強等瓶頸，可能成為AD治療的新手段。
結題摘要
人口日趨老齡化使阿爾茨海默病(AD)成為當今社會最為嚴峻的課題之一。β澱粉樣蛋白(Aβ)是造成AD的元兇，Aβ42聚集到中後期形成老年斑時伴有大量激活的小膠質細胞、炎性因子以及毒性產物，這些物質與Aβ相互激發形成惡性毒性網路加速了老年斑的形成，抗炎治療是必須措施。然而受制於血腦屏障，目前針對Aβ和顱內炎症為靶點的治療手段有限。 研究發現miRNA-101在海馬組織中表達，是APP（Aβ42前體）的負性調節子，在下調APP同時還抑制炎症因子COX-2的表達。我們的前期研究顯示：快速老化小鼠SAMP8海馬區miRNA-101水平顯著下降；且miRNA-101過表達可顯著抑制N2a細胞Aβ的生成。 在此基礎上，我們選擇APP為靶點，成功構建了神經元特異性NSE啟動子控制的miRNA-101重組體（pNSE-miR-101），確定了超聲微泡SonoVue載pNSE-miR-101的最佳包載率。進而，套用低頻超聲協同SonoVue微泡開放靶區血腦屏障（最佳參數為實時造影Flash模式，輻照間隔 5 s、輻照總時長 3 min，Sonovue 0.3ml/25g小鼠體重），Real-Time PCR結果顯示，我們實現了靜脈給藥途徑下pNSE-miR-101靶向表達於快速老化鼠SAMP8鼠的海馬區神經元內。隨後採用半定量RT-PCR和Western Blot檢測，結果顯示超聲輻照側海馬組織中miR-101的上調，對Aβ生成和炎性因子COX-2表達起雙重抑制作用，且對COX-1的表達和實驗鼠血清及胃組織中PGE2（有利於維持胃黏膜的完整性）的含量無顯著性影響。最後，採用Morris水迷宮系統測試實驗小鼠空間記憶能力，結果顯示：UMMD（Ultrasound-mediated microbubble destruction）介導的pNSE-miR-101轉染的SAMP8鼠，與未處理的SAMP8鼠相比，潛伏期顯著縮短（p＜0.01），搜尋平台路徑明顯改善。綜上所述，本項目聯合利用無創、可重複輸注的UMMD靶向轉基因技術、神經元特異性表達啟動子NSE和miRNA-101對APP、COX-2負性調控等優勢，突破了miRNA-101無創跨越血腦屏障打靶于海馬神經元這一瓶頸，並達到對Aβ生成及炎症反應的雙重抑制作用，可為臨床上AD的安全、特異性基因治療提供一條新的途徑和思路。
