以中介素為靶向的膠質瘤治療研究及其機制探討

《以中介素為靶向的膠質瘤治療研究及其機制探討》是依託四川大學，由張恆擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：以中介素為靶向的膠質瘤治療研究及其機制探討
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：張恆
• 依託單位：四川大學

項目摘要

膠質瘤內的新生血管形成是個多因子共同參與的過程。因此，尋找新的血管調控機制並針對其設計更有效的治療策略,已成為目前膠質瘤抗血管治療的重要研究方向。我們在前期研究中發現，一種名為中介素的激素樣多肽，以一種目前尚未闡明的新機制調控血管生長，其主要作用為促進血管成熟和正常化，改善血液灌流情況，並與VEGF有協同作用。我們進一步發現，中介素還與膠質瘤內的血管生長過程密切相關。因此，本項目即根據中介素的這種血管調控作用設計了兩種膠質瘤治療方案：其一為直接阻斷中介素以破壞血管結構，另一種則是利用其誘導腫瘤血管正常化的功能，與化療藥物聯用以增強治療效果。我們預期能找到一種在療效上優於傳統藥物，並有臨床套用前景的治療方案。我們還期望能通過本項目的研究成果，闡明一條新的血管調控機制。目前，國際國內均無這一研究的相關報導，因此本課題具有很好的創新性和研究價值。

結題摘要

顱內膠質瘤是對人類生命和健康危害較大的疾病。針對膠質瘤的基礎研究的一個重要部分就是探索其新生血管形成的分子機制。我們在前期研究中發現，一種名為中介素的激素樣多肽，以一種目前尚未闡明的新機制調控血管生長。因此，本項目即根據中介素的這種血管調控提出了膠質瘤的治療假說並試圖驗證。 在本項研究中，我們為了對研究對象——中介素進行調控，首先通過Real time PCR篩選4條候選siRNA，發現siR-36653和siR-228213可有效抑制內皮細胞IMD表達；然後通過Western blot檢測發現siR-228213抑制效果最明顯，且證實siR-228213可顯著抑制血管腔擴張。我們通過實驗證實了在缺氧情況下，IMD在A172、C6、U251和內皮細胞中的表達明顯升高；Fibrin beads assay體外血管生長實驗顯示，IMD可誘導血管形成具有等級結構的、形態正常的血管網路，進一步提示了IMD在腫瘤血管生成中的靶向特徵。為了弄清楚IMD在血管生成作用中的內在機制，我們進行了血管內皮細胞的檢測。結果發現第一個可能的通路是IMD誘導內皮細胞Akt磷酸化——使用Akt通路抑制劑Wortmannin可抑制IMD的血管活性。第二個可能的通路是通過ERK1/2信號通路發揮作用。這是因為WB檢測發現IMD可誘導內皮細胞ERK1/2磷酸化，使用ERK抑制劑PD98059可有效抑制IMD的血管活性。IMD誘導血管生成的第三個機制可能是通過作用於內皮細胞表面的CRLR/RAMP2受體複合物而產生的作用。因為我們RT-PCR檢測發現內皮細胞中只表達RAMP2，而不表達RAMP1和RAMP3。用siRNA沉默RAMP2後，IMD不能誘導Akt磷酸化。沉默RAMP2後，IMD不能誘導EKR1/2磷酸化。沉默RAMP2後，IMD不能限制血管出芽。沉默RAMP2後，IMD不能促使血管腔擴張。對腫瘤團塊而言，IMD通過促進腫瘤血管正常化增加血供。而動物實驗也從另一個側面證實了阻斷IMD可通過減少腫瘤血供而抑制腫瘤生長。 總的看來，我們通過本項研究證實了原有的假說：IMD在缺氧表達下上調，促進膠質瘤血管正常化，通過增加血供而促進膠質瘤生長；阻斷IMD可減少腫瘤血供，從而抑制膠質瘤生長。本研究將為膠質瘤的抗血管生成靶向治療提供一個可能的方向。