基本介紹
- 中文名：人腦血管平滑肌細胞
- 外文名：Human Brain Vascular Smooth Muscle Cells
概述,推薦培養基,保存,運輸,細胞培養說明,維持培養,傳代培養,注意,
概述
血管平滑肌細胞是許多動脈疾病的細胞水平的根源。血管平滑肌細胞的加速生長潛能是血管疾病進展的關鍵因素。最新研究表明血管平滑肌細胞表達的ICAM-1和VCAM-1能促進血管壁的炎症反應，並且與血管疾病的發展及穩定性有關.人血管平滑肌細胞的體外培養是血管研究中的重要模型，並將對血管疾病的藥理學和治療研究提供大量信息.
推薦培養基
平滑肌細胞培養基
保存
液氮
運輸
乾冰
細胞培養說明
注意：冷凍保存的細胞非常脆弱。將小瓶置於37°C水浴，然後儘快移入培養物中，儘量減少操作。
經過以下步驟後開始培養細胞
1.準備多聚賴氨酸包被的培養瓶(2μg/cm2，推薦用T-75的培養瓶)。向T-75瓶內加入10ml無菌水，然後加入15μl多聚賴氨酸原液(10mg/ml).將培養瓶放入培養箱中過夜(至少在37°C中過一小時)
2.準備完全培養基：用70%的酒精為培養基和添加物的外表面消毒，然後放到無菌的地方。在無菌環境下打開每一個添加物小管並用吸管加入到基本培養基中。用培養基沖洗每一個小管以保證添加物全部加入基本培養基中。
3.用無菌水沖洗多聚賴氨酸包被的培養瓶兩次並向瓶內加入20ml完全培養基。將培養瓶放入超淨台中，然後融化細胞。
4.將小瓶放入37°C水浴中，輕輕地握住並旋轉小瓶直到完全融化。將小瓶立刻移出水浴，擦乾，用70%的酒精沖洗小瓶，然後放到無菌環境中。小心地打開蓋子，注意手指不要碰到裡面。用1mleppendorf吸管輕輕重懸管內容物。
5.將管中內含物放入均勻的，多聚賴氨酸包被的培養瓶中。推薦接種密度為5,000cells/cm2。
注意：細胞融化後不推薦稀釋和離心，因為這些操作比培養基中DMSO殘留物對細胞的傷害大。血管平滑肌細胞接種在多聚賴氨酸包被的培養瓶中能促進細胞帖壁。
6.蓋好蓋子，輕輕地搖晃培養瓶以使細胞分布均勻，如需氣體交換則打開瓶蓋。
7.將培養容器放入培養箱中。
8.為了得到良好的結果，在培養開始後至少16個小時內不要動培養物。第天天更換培養基以去除殘留的DMSO和未貼壁的細胞，然後每隔一天進行如上操作。培養良好的細胞將呈現紡錘體形，通常細胞呈均勻的叢狀或板狀而不是單個分散的細胞，並且細胞數量在培養2-3天后會加倍。
維持培養
1.從冰凍的細胞構建培養物後，第二天早晨更換新鮮的含有添加物的培養基。隨後的傳代培養中，每隔48小時更換一次培養基。
2.每隔一天更換一次培養基，直到細胞有50%融合。
3.一旦細胞達到50%融合，則要每天更換培養基直到細胞大約達到90%融合。
傳代培養
1.細胞達到90%融合時需傳代培養。
2.準備多聚賴氨酸包被的培養瓶(2μg/cm2)。
3.加執培養基，胰酶/EDTA消化液，胰酶中和液和DPBS(磷酸鹽緩衝液)到室溫。我們不推薦在使用前用37°C水浴加熱試劑和培養基。
4.用DPBS沖洗細胞。
6.收取細胞並將其移入50ml離心管中。另外用10ml生長培養基沖洗培養瓶以收集殘留的細胞。在顯微鏡下觀察剩餘細胞數量以確定是否收集成功。剩餘細胞數應小於5%。
7.以1000轉離心收取的細胞5分鐘，然後在生長培養基中重懸細胞。
8.細胞計數然後將它們接種到新的，多聚賴氨酸包被過的培養瓶中，細胞密度以推薦數值為準。
注意
處理人類來源的產品存在潛在的風險。儘管每一株細胞都經檢測愛滋病毒，B肝病毒，C肝病毒呈陰性，檢測不能達到100%準確，因此，必須採取適當的保護措施避免無意的暴露。操作這些產品時要帶手套和安全鏡。不要用嘴吸。我們推薦以下通用的程式來處理人類來源的產品，從而以最小的預防來對抗污染。
