《人細小病毒B19複製轉錄變異的分子調控機制研究》是依託杭州師範大學，由陳兆軍擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：人細小病毒B19複製轉錄變異的分子調控機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：陳兆軍
- 依託單位：杭州師範大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
人細小病毒科紅細胞病毒屬有B19、A6和V9三種基因型，其中B19毒力最強，可導致貧血、再障、心肌炎等疾病，目前對三者的差異研究十分有限。本課題旨在探討三種病毒型在複製轉錄過程中的差異及其潛在的分子調控機制，擬通過轉移B19病毒基因的ITR序列至A6 和V9病毒的基因兩端，進行感染性克隆構建、轉染及表達，再分別經Southern Blot檢測三種病毒型的基因複製異同，經Northern Blot、qRT-PCR檢測基因轉錄異同，經RNA酶保護實驗檢測轉錄剪下點異同，繪製三種病毒型的基因轉錄圖譜，通過定點突變和轉錄因子篩查，揭示導致三者基因複製轉錄差異的分子調控機制。該項研究有助於闡明人細小病毒B19、A6和V9三種基因型毒力差異的根本原因，為此類病毒所致疾病的治療提供一定的理論依據。
結題摘要
人細小病毒B19屬於紅病毒屬中的人細小病毒科，可以感染人類造成惡性貧血，胎兒水腫，死胎等多種疾病。目前已鑑定出三種亞型，A6，V9和Genotyp-1，它們之間存在12%的基因組序列的差異。然而，A6和V9的基因轉錄本還沒有闡明。 在這項研究中，我們系統的鑑定了細小病毒A6和V9以及最近發現的非靈長類動物的細小病毒，花栗鼠細小病毒（chpv）的轉錄譜。我們還對Genotyp-1反向末端重複（ITRS）對缺乏末端的A6和V9基因組的複製能力進行了探討。 我們的研究結果表明：雖然A6的整體轉錄譜與Genotyp-1型B19病毒類似，但在含有可轉錄A6基因組質粒的COS-7和UT7 / Epo-s1細胞里，其轉錄產生RNA的過程是有差異的。位於非結構蛋白NS1的第二個剪接產物的接受體是無效的，但V9型的轉錄本卻類似於Genotyp-1型B19病毒的轉錄本。有趣的是，Genotyp-1型的末端反轉重複序列可以支持V9基因組在UT7 / Epo-s1細胞里進行複製，但卻不能支持A6基因組複製。 此外，我們還鑑定了一種獨特的花栗鼠細小病毒的轉錄本。與其他同屬病毒不同，花栗鼠細小病毒基因組中較小的那段RNA雖然也使用內部的多聚腺苷酸化位點，但它不是編碼較小的非結構蛋白的RNA。我們的結果證明，人細小病毒A6，V9和花栗鼠細小病毒（chpv）的大非結構蛋白NS1是UT7 / Epo-s1細胞的凋亡誘導因子，這與Genotyp-1型的NS1結果類似。我們的結果支持花栗鼠細小病毒（chpv）可能代表細小病毒屬一個新組，也許在病毒亞科一個新屬。 為了進一步了解B19病毒在中國東部地區的流行狀況，我們研究了患有貧血，呼吸道肺炎支原體感染的患者，梅毒抗體陽性的患者，獻血員，HIV陽性的靜脈藥癮者以及健康志願者的血漿樣本，利用ELISA法和q-PCR分析不同人群B19V-IgM，B19V-IgG以及B19V-DNA。結果表明，不同人群，B19V-IgG的水平在21.9%~ 41.8%之間，表明我國東部地區呈現低度B19病毒的流行。在總共1290份樣本中，我們發現兩位獻血員和一位肺炎支原體感染的患者，B19V-IgM陽性，而且這位肺支血清病毒負載量為2.86×10^6/ml。在HIV陽性的靜脈藥癮者中，DNA陽性率為7.1%，發現靜脈藥癮者感染的B19病毒在NS1第558位胺基酸發生突變。
