人細小病毒B19 VP1獨特區蛋白致腎臟足細胞病變的機制

《人細小病毒B19 VP1獨特區蛋白致腎臟足細胞病變的機制》是依託廈門大學，由聶曉晶擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：人細小病毒B19 VP1獨特區蛋白致腎臟足細胞病變的機制
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：聶曉晶
• 依託單位：廈門大學

項目摘要

人細小病毒B19（B19病毒）是病毒性腎病的重要病原，與病情重、進展快、療效及預後差的塌陷性腎小球病密切相關。我們前期研究證明B19病毒VP1獨特區蛋白（VP1u蛋白）可誘發小鼠腎臟足細胞明顯病變，並首先發現VP1u蛋白與細胞凋亡有關。但是，VP1u蛋白致足細胞病變的具體機制尚未闡明。本項目擬使用VP1u蛋白和已標記的VP1u蛋白作用於離體培養的足細胞，觀察VP1u蛋白如何進入足細胞及在細胞內的分布，檢測整合素、鈣結合蛋白、TNF-α、NF-κB、Bax和Bcl-2等關鍵分子和蛋白的變化，並通過過表達或干涉實驗分析證明關鍵分子通路機制（如TNFR信號通路），以期闡明B19病毒VP1u蛋白損傷腎臟足細胞的機理，對病毒性腎病的防治提供新的理論依據。

結題摘要

背景 人細小病毒B19（B19病毒）是病毒性腎病的重要病原，與病情重、進展快、療效及預後差的塌陷性腎小球病密切相關。在項目組發現B19病毒VP1獨特區蛋白（VP1u蛋白）可致小鼠腎臟足細胞病變的基礎上，本項目進一步探討VP1u蛋白致足細胞病變具體機制。方法 用B19病毒VP1u蛋白、磷酸酶A2（PLA2）增強劑和抑制劑干預足細胞，MTT法檢測細胞存活率、免疫螢光顯微鏡觀察細胞骨架變化，分析VP1u蛋白能否發揮PLA2活性損傷足細胞；用綠色螢光FITC標記VP1u蛋白後干預足細胞，免疫螢光顯微鏡和雷射共聚焦顯微鏡觀察足細胞內VP1u蛋白分布情況，再用ELISA法、Western blot法檢測經VP1u蛋白干預後足細胞內及細胞膜上VP1u蛋白量，進一步驗證VP1u蛋白能否進入足細胞；接著，使用細胞內吞作用抑制劑與VP1u蛋白共同干預足細胞，研究VP1u蛋白進入足細胞的方式；最後，通過Western Blot檢測TNFR信號通路和Notch信號通路中關鍵分子變化情況，探討足細胞損傷的主要信號通路。結果 ①獲得高純度B19病毒VP1u蛋白；②B19病毒VP1u蛋白發揮PLA2活性直接損傷足細胞；③B19病毒VP1u蛋白可以進入腎臟足細胞；④B19病毒VP1u蛋白通過小窩蛋白調控的細胞內吞作用進入足細胞；⑤B19病毒VP1u蛋白損傷腎臟足細胞的主要信號通路有TNFR信號通路、Notch信號通路；⑥在中華系列雜誌發表論文2篇（2篇SCI論文投稿中），參編專著3本，獲批國家發明專利1項，兒科學術年會大會發言4次，參加美國腎臟病年會1次，獲得國際性獎勵2項，培養博士後1名、碩士研究生2名，3名項目組成員出國留學半年以上。結論 B19病毒VP1u蛋白由病毒蛋白毒性直接損傷腎臟足細胞，與其他病毒感染通過免疫途徑致腎臟損傷的機制不同，對B19病毒VP1u蛋白構建的病毒性腎病動物模型進行深入研究，將有助於闡明非免疫介導的病毒性腎病發病機制。