人白介素ELISA試劑盒

英文名稱：Human Interleukin ELISA Kit，規格96T/48T兩種規格，本試劑盒套用雙抗體夾心法測定標本中人白介素水平。用純化的人白介素抗體包被微孔板，製成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白介素，再與HRP標記的白介素抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物，經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。

基本介紹

• 中文名：人白介素ELISA試劑盒
• 外文名：Human Interleukin ELISA Kit
• 規格：96T/48T
• 特點：套用雙抗體夾心法測定

簡介

TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中人白介素含量。

ELISA試劑盒圖片

試劑盒組成

試劑盒組成	48孔配置	96孔配置	保存
說明書	1份	1份
封板膜	2片(48)	2片(96)
密封袋	1個	1個
酶標包被板	1×48	1×96	2-8℃保存
標準品：270ng/L	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃保存
標準品稀釋液	1.5ml×1瓶	1.5ml×1瓶	2-8℃保存
酶標試劑	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
樣品稀釋液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
顯色劑A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
顯色劑B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
終止液	3ml×1瓶	6ml×1瓶	2-8℃保存
濃縮洗滌液	(20ml×20倍)×1瓶	(20ml×30倍)×1瓶	2-8℃保存

樣本處理及要求

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如出現沉澱，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘後，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反覆凍融，以使細胞破壞並放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本後，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘冷凍備用。

6. 標本採集後儘早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應儘快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於-20℃保存，但應避免反覆凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然後在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然後從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻後從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋後各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/L，15 ng/L)。

2.加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加於酶標板孔底部，儘量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板後置38℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋後備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩乾，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍乾。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震盪混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行。

試劑盒注意事項

1． 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3． 各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定，計算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6． 底物請避光保存。

7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9． 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標， 在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預期濃度相關係數R值為0.990以上。

2.批內與批見應分別小於9%和11%

保存條件及有效期

1.試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

人白介素-1

特異性：Hu IL-1a，檢測範圍：3.9pg/ml~250pg/ml，靈敏度：2pg/ml，標本用量：100ul/well。本試劑盒採用雙抗體夾心ELISA法的原理製備，適用於體外定量檢測人血清、血漿、組織、體液或細胞培養上清液中的天然和重組的IL-1a濃度。白介素-1（IL-1）是IL-1α和IL-1β兩種蛋白的統稱，是由不同基因編碼的，但它們識別細胞表面相同的受體。IL-1α和IL-1β結構相似，在胺基酸水平上有25%的同源性；兩種都是由分子量31kDa前體裂解成17.5kDa的蛋白質。IL-1α和IL-1β都不包含典型的疏水信號肽，但是有證據證明一些非典型路徑可以分泌這些因子。大量的IL-1α以前體形式保留在胞內。一部分未修飾的IL-1α運輸到細胞表面但仍與細胞相連。未修飾的膜結合IL-1α體現生物活性，鄰近的細胞旁分泌IL-1。IL-1α和IL-1β與特定的受體結合後發揮其作用。

人白介素-2

特異性：Human IL-2，檢測範圍：7.8pg/ml~500pg/ml，高靈敏度：4pg/ml，高特異性：不與IL-1,3,4,5,6,8,10,12,IFN,TNF,VEGF,TGF及ICAM等反應，高重複性：板內、板間變異係數均<10%，標本用量：100ul/well。本實驗採用雙抗體夾心ELISA法，適用於體外定量檢測人血清、血漿、組織或細胞培養上清液中天然和重組的IL-2濃度。白介素2 (IL-2)主要由絲裂原或抗原激活的T淋巴細胞表達的。它在促進抗原特異性增殖的T細胞克隆增殖中起重要作用。另外，IL-2也參與其他不同種類細胞的多個免疫反應。IL-2刺激胸腺細胞增殖；刺激激活的B細胞增殖與分化；促進單核細胞的生長、分化與細胞殺傷能力；誘導自然殺傷細胞的生長與刺激這些細胞的細胞因子表達以及細胞殺傷能力；增加淋巴激活殺傷細胞(LAK)的產生；誘導少突膠質細胞的增殖與分化。人IL-2的cDNA編碼153個胺基酸糖蛋白前體包含20個胺基酸組成的信號肽，成熟時信號肽被剪下掉。在胺基酸水平序列上，小鼠IL-2與人IL-2的序列同源性達60%。人IL-2可以在小鼠細胞中活化，但是小鼠IL-2不能在人細胞中活化。IL-2基因定位在染色體4q位點。

人IL-2sRa

特異性：Hu IL-2sRa，檢測範圍：62.5pg/ml~4000pg/ml，靈敏度：30pg/ml，標本用量：100ul/well。本試劑盒採用雙抗體夾心ELISA法的原理製備，適用於體外定量檢測人血清、血漿、組織、體液或細胞培養上清液中的天然和重組的IL-2sRa濃度。白介素2（IL-2）是通過結合多分子細胞受體複合物發揮生物活力的。多年來，這個受體複合物被認為是由IL-2Rα與IL-2β兩個糖蛋白鏈組成的，兩個亞基相互結合在一起形成一個高親和力受體來傳遞IL-2信號的。IL-2Rα（也稱為Tac抗原或CD25），是一個分子量為55kD跨膜糖蛋白，有351個胺基酸組成。IL-2β在1989年被克隆出來，它是個由575個胺基酸組成的跨膜糖蛋白，分子量為75kD，其中有286個胺基酸位於胞漿內，更顯著地參與了細胞信號傳導作用。常認為它是IL-2一種弱抑制劑。在任何情況下，體液中增高的可溶性IL-2Rα常伴隨這T細胞與B細胞的增加與免疫系統的激活。

人白介素系列

人白介素-4（IL-4）ELISA試劑盒

人白介素-5（IL-5）ELISA試劑盒

人白介素-6（IL-6）ELISA試劑盒

人白介素-8（IL-8）ELISA試劑盒

人白介素-10（IL-10）ELISA試劑盒

人白介素-13（IL-13）ELISA試劑盒

人白介素-17（IL-17）ELISA試劑盒

人白介素-18（IL-18）ELISA試劑盒

人白介素-20（IL-20）ELISA試劑盒

IL-2對B細胞的作用IL-2可促進B細胞表達IL-2R，促使B胞增殖和產生免疫球蛋白，並刺激巨噬細胞，提高其吞噬能力。近年發現，重組IL-2可刺激某些中樞神經細胞的生長和成熟，並作用於嗎啡肽受體，產生鎮痛作用。有關白細胞介素一2 (IL-2 )的調節免疫作用。

人白介素6(IL-6)ELISA試劑盒
人白介素6(IL-6)ELISA試劑盒
人白介素10(IL-10)ELISA試劑盒
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