交錯延伸PCR

交錯延伸(stagger extension process, StEP)是在一個PCR反應體系中，以兩個以上相關的DNA片段為模板進行PCR反應，引物先在一個模板鏈上延伸，隨之進行多輪變性、短暫復性的過程。在每一輪PCR循環中，之前延伸的小片段均會隨機的與一個模板鹼基互補配對繼續延伸，由於模板的轉換而實現不同模板間的重組，最終實現全長基因片段的獲得。

基本介紹

• 中文名：交錯延伸PCR
• 外文名：stagger extension process,
• 縮寫：StEP
• 簡介：常規的退火和延伸合併為一步

，經變性的新生鏈再作為引物與體系內同時存在的不同模板退火而繼續延伸。此過程反覆進行，直到產生完整的基因長度。

基本步驟為：

1）變性模板鏈與引物結合

2）短暫延伸形成小片段

3）另一循環時，小片段與模板隨機結合作為引物（template switching）並繼續延伸

4）重複上述過程直至全長基因形成即最終得到新組合的基因

交錯延伸PCR示意圖

交錯延伸PCR的特點

一、省去了用DNA酶切割成片段這一步，簡化了DNA改組的方法。

二、交錯延伸法重組發生在單一試管中，不需分離親本DNA和產生的重組DNA。它採用的是變換模板機制，這正是逆轉錄病毒所採用的進化機制。