三維數控腫瘤細胞EMT微流控晶片的構建及其初步套用

《三維數控腫瘤細胞EMT微流控晶片的構建及其初步套用》是依託浙江大學，由潘小艷擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：三維數控腫瘤細胞EMT微流控晶片的構建及其初步套用
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：潘小艷
• 項目類別：青年科學基金項目

項目摘要

癌症是威脅人類生命的二號殺手，其中腫瘤細胞侵襲轉移是病情惡化的重要標誌，而上皮間質轉化（EMT）是其轉移的前兆。傳統研究腫瘤細胞EMT的方法存在一定的局限性，而微流控晶片技術具有數控、微量、三維、實時培養細胞等優點，能彌補其不足。本項目擬構建並最佳化可用於研究腫瘤細胞EMT並集成數控線上轉染模組的微流控晶片；以胃癌細胞株為模型，利用三維共培養的間質細胞和血管內皮細胞誘導胃癌細胞發生EMT；通過數控線上轉染針對Smad4的RNA干擾片段，對胃癌細胞EMT經典通路實施阻抑；並用TGF-β單克隆抗體和靶向藥舒尼替尼進行干預，反向抑制胃癌細胞發生EMT；最後，綜合考察該晶片的性能，為下一步腫瘤細胞EMT機制研究提供可靠的技術支撐。該晶片的成功研製，將為臨床彌足珍貴的新鮮腫瘤組織細胞進行EMT研究提供有效手段。

結題摘要

腫瘤細胞侵襲轉移是癌症病情惡化的重要標誌，而上皮間質轉化（EMT）是其轉移的前兆。腫瘤細胞EMT的發生與腫瘤微環境和惡性腫瘤細胞相互作用密切相關。傳統研究腫瘤細胞微環境和EMT的方法存在一定的局限性，而微流控晶片技術具有數控、微量、三維、實時培養細胞等優點，能彌補其不足。本項目構建並最佳化腫瘤細胞線上轉染和EMT微流控晶片，以具有不同轉移能力的胃癌細胞株AGS、SGC-7901和MKN-1為模型，通過線上轉染針對Smad4的RNA 干擾片段對胃癌細胞EMT經典通路實施阻抑，採用FITC標記的RNA片段觀察轉染效率，效率可達80%以上；採用細胞免疫螢光法檢測EMT相關蛋白表達，Snail、SMA表達下調，而E-cadherin表達上調，符合預期，並和在晶片外培養皿中轉染、western blot檢測蛋白表達結果一致。利用微流控晶片上三維共培養的成纖維細胞（血管內皮細胞）誘導胃癌細胞發生EMT，觀察胃癌細胞株AGS、SGC-7901和MKN-1的遷移能力，遷移能力有所增加。使用TGF-β單克隆抗體SB431542反向抑制胃癌細胞發生EMT，胃癌細胞遷移得到抑制。鑒於此腫瘤細胞轉染和共培養EMT 研究微流控晶片平台具有很大程度上的普適性，本項目也將為其它腫瘤微環境研究提供一種新的技術手段。